УРОГЕНИТАЛЬНЫЙ ХЛАМИДИОЗ У ЖЕНЩИН

• Выделение хламидий в культуре клеток является традиционным методом диагностики. Этот метод обладает наивысшей 100%-ной специфичностью и является "золотым стандартом" и юридическим стандартом для C.trachomatis. Однако его использование ограничено в связи с чрезвычайно высокой трудоёмкостью (расход времени от 42 до 72 часов), дороговизной (оснащённая лаборатория, транспортировка живых организмов), ложноот-рицательными результатами. /

• Обнаружение цитоплазматических включений хламидий в эпителиальных клетках препаратов, окрашенных по методу Романовского-Гимзы, является классическим методом диагностики хламидиозов. Цитоплазматиче-ские включения представляют собой компактные или рыхло расположенные зернистые массы, содержащие морфологические структуры возбудителя на разных этапах его размножения. Они часто определяются вблизи ядра, нередко смещают его к периферии клетки, имеют разнообразную форму, отличаясь от ядра и цитоплазмы. Мелкие, ранние включения, содержащие крупные тельца, имеют сине-фиолетовую окраску, крупные включения с преимущественно мелкими зрелыми структурами возбудителя - розово-красную. Однако метод имеет низкую чувствительность и позволяет диагностировать около 10-15% случаев хламидийной инфекции, да и то при достаточно высокой квалификации лаборанта и при больших временных затратах. Данный метод имеет право на существование лишь при технической невозможности применения других методов.

• Для серодиагностики используют следующие методы - общепринятую РСК (реакция связывания комплемента) и серодиагностику с родоспецифи-ческим антигеном (общим для С. tracho-matis и С. psittaci), а также микрометод реакции непрямой иммунофлюоресценции (НИФ) с типоспецифиче-скими антигенами C.trachomaris. Серологические методы просты в исполнении, однако дают большой процент ложноположительных результатов,

обусловленных перенесенной в прошлом хламидийной инфекцией. Они имеют ограниченную ценность для диагностики хламидийной инфекции. Для подтверждения хламидийной инфекции необходимо использовать дополнительные методы или проводить повторные серологические исследования для наблюдения за титром реакции. РСК позволяет определить только групповые антигены, малочувствительна и у больных хламидийными уретритами дает не более 15% положительных результатов [Доклад Научной группы ВОЗ, 1984]. Серологические методы непригодны для диагностики при острых генитальных инфекциях, но могут быть полезными при осложненных или хронических инфекциях, а также как методы скрининга больших групп населения с последующим отбором серопозитивных лиц для дальнейшего обследования.

• Диагностика с помощью иммуноферментного анализа (ИФА) основана на улавливании изменения цвета субстрата спектрофотометром. Достоинства ИФА заключаются в простоте транспортировки и хранения полученных материалов, объективности оценки результатов, возможности автоматизации и одновременного исследования множества проб. Его недостатком является невозможность исключения ложноположительной реакции, сложность контроля за качеством исследований, высокая стоимость аппаратуры, меньшая чувствительность и специфичность метода, чем реакция прямой иммунофлюоресценции (ПИФ) с моноклональными антителами.

• Тесты, основанные на методике ДНК-зондов, имеют множество преимуществ с точки зрения удобств транспортировки, обработки больших партий и скорости исследования. Один из тестов, основанных на методе ДНК-зондов, состоит из отдельных, меченных акридином ДНК-зондов для C.trachomatis и Neisseria gonorrhoeae, коплементарных нуклеотидной последовательности рибосомной РНК каждого из патогенных микроорганизмов. Это позволяет учитывать результаты гибридизации по хемолюминесцен-ции. Так как рибосомной РНК в клетке в 10⁴ раз меньше чем ДНК, такая методика является более чувствительной, по сравнению с методами, в которых мишенью для зондов выступает ДНК. Новая методика сравнима или превосходит культуральную и некоторые методы ИФА при исследовании цервикального материала. Её чувствительность и специфичность 78-97% и 98-100% соответственно. Однако этот метод, как и ИФА, имеет относительно низкую по сравнению с культуральным методом чувствительность при вялотекущей инфекции.

• Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) и его варианты обнаруживают инфекцию по нескольким молекулам ДНК. ПЦР является стандартным методом амплификации ДНК во многих молекулярно-биологических лабораториях. Основу методики составляют повторяющиеся циклы направляемого олигонуклеотидами синтеза ДНК, приводящие к репликации in vitro нуклеотидных последовательностей мишени. Основные преимущества

метода ПЦР высокая чувствительность и специфичность, неинвазивность и простота сбора проб; простые требования к условиям транспортировки и хранения; возможность скрининга больших популяций; скрининг бессим-птомной инфекции, постановка реакции в полуавтоматическом режиме и быстрота получения результатов. Метод применяется как при исследовании цервикальных и уретральных мазков, так и осадка мочи Исследование в качестве исследуемого материала мочи, представляет собой неинвазив-ный метод диагностики или скрининга уретральной инфекции у мужчин, значительно упрощающий обследование. На сегодняшний день, безусловно, это наиболее чувствительный метод диагностики генитальной хлами-дийной инфекции.

• Лигазная цепная реакция (ЛЦР) - это второй молекулярно-биологичес-кий метод выявления хламидий. В его основе лежит лигирование олигону-клеотидов, комплементарных определенной ДНК-мишени. В методе используется способность ДНК-лигазы соединять 2 пары комплементарных олигонуклеотидов после их гибридизации с последовательностями мишени m vitro ЛЦР может быть использована для анализа уретральных, эндоцер-викальных образцов и проб мочи, представляя собой неинвазивный метод скрининга для выявления C.trachomatis. ЛЦР явилась первой методикой, обладающей повышенной чувствительностью определения C.trachomatis в моче у женщин. Чувствительность и специфичность метода составляет 94,7% и 99,8% соответственно по сравнению с культуральным методом.

• Транскрипционная амплификация (ТА) - новый метод молекулярной амплификации C.trachomatis, который основан на применении амплификации посредством транскрипции и гибридизационной защиты для качественного определения рибосомной РНК С. trachomatis в эндоцервикальных образцах, уретральных образцах у мужчин, а также в исследуемых пробах мочи обоих полов. Чувствительность нового метода будет чрезвычайно высокой (>99%), однако для окончательного определения его эффективности требуются дополнительные исследования в различных популяциях.

• Иммунофлуоресцентный метод - прямая иммунофлуоресценция (ПИФ) с использованием моноклональных антител против основного белка наружной мембраны (МОМР) Chlamydia trachomatis - является в настоящее время во всем миреосновным методом диагностики. С использованием ПИФ впервые стало возможным быстро и точно выявлять хламидийную инфекцию в исследуемом материале (30-40 минут). ПИФ включает использование меченных флуоресцеином моноклональных антител как к липопо-лисахариду, так и к основному белку наружной мембраны (МОМР) хламидий. Фиксированный на предметном стекле мазок обрабатывается флуоресцирующими антителами и исследуется под флуоресцентным микроскопом после 20-минутной инкубации. Метод ПИФ высокочувствительный, специфичный, просг в исполнении Недостатком метода является то, что

само обнаружение наружной мембраны хламидий ещё не является доказательством наличия жизнеспособного организма. Это следует учитывать при установлении излеченности от хламидиоза. Кроме того, метод ПИФ недостаточно чувствительней при асимптомной и вялотекущей инфекции.

Таким образом, с практической точки зрения наиболее удобным, информативным, быстрым по исполнению методом первичной диагностики хла-мидийной инфекции можно считать метод ПИФ (прямой иммунофлуорес-ценции) с моноклональными антителами. Методы молекулярной амплификации (ПЦР, ЛЦР, ТА) являются средством массового скрининга пациентов для обнаружения C.trachomatis. Метод ПЦР - наиболее чувствительный не-культуральный метод диагностики хламидийной инфекции. В таблице 4.4 приведена суммированная оценка чувствительности различных методов диагностики инфекций, вызванных Chlamydia trachomatis.

Таблица 4.4.

ОЦЕНКА ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ МЕТОДОВ ДИАГНОСТИКИ ХЛАМИДИЙНОЙ ИНФЕКЦИИ

Метод диагностики

Следует отметить, что чувствительность зависит от изучаемой популяции. Наблюдались различия в чувствительности одного и того же метода при обследовании мужской и женской популяции. Следовательно, при интерпретации этих оценок необходимо располагать детальным описанием исследованной популяции. Применение ПЦР-диагностикумов выявило недооценку распространенности хламидийных инфекций. Реальной проверкой диагностических методов будет перспективное исследование в популяциях с низким и высоким распространением инфекции с использованием лучших "самодельных" и коммерческих ПЦР- и ЛЦР-диагностикумов. Методики на основе ПЦР расширяют наше понимание эпидемиологии инфекций, вызванных Chlamy-dia trachomatis, обеспечивая нас лучшими средствами диагностики и типирования.

ЛЕЧЕНИЕ