При дыхании и брожении происходит распад сахара с выделением энергии, согласно следующим упрощенным уравнениям, отражающим суммарный результата дыхания и спиртового брожения:
Однако указанный путь брожения не единственный. Если, например, в субстрате отсутствует фермент пируватдекарбоксилаза, то не происходит расщепления пировиноградной кислоты до уксусного альдегида и восстановлению подвергается непосредственно сама пировиноградная кислота, превращающаяся при этом в молочную:
СН3СОСООН + 2 Н+ = СН3СНОНСООН.
Таким путем идет образование молочной кислоты при гликолизе в животных организмах, а также при яблочно-молочнокислом брожении.
При внесении в бродящую смесь бисульфита натрия происходит его связывание с ацетальдегидом. В результате чего 3-фосфоглицериновый альдегид восстанавливается до глицеринфосфорной кислоты. Последняя гидролизуется дрожжевой фосфотрансферазой с образованием глицерина.
Наряду с главными продуктами – спиртом и углекислотой – при спиртовом брожении образуются также вторичные продукты, роль которых достаточно велика в формировании аромата и вкуса вин. К числу вторичных продуктов относятся: глицерин (г), янтарная кислота (я), уксусная кислота (у), ацетальдегид (а), 2,3-бутиленгликоль (б), ацетоин (ац), лимонная кислота (л), пировиноградная кислота (п), изоамиловый спирт (и), изопропилопый спирт (пр), эфиры. В.З. Гваладзе и Л Женевуа были выведены уравнения, показывающие зависимость, связывающую количество глицерина и других вторичных продуктов:
Г = п + а+ 2у + 5я + 2ац + б + 9л + 3и + 3пр.
Сумма вторичных продуктов правой части этого уравнения составляет в среднем 80-92 % от содержания глицерина.
Изменение составных веществ сусла в процессе брожения.
1) В результате превращения углеводов при брожении до основных продуктов брожения в сухих винах практически нет сахарозы, гексозы находятся в очень малых количествах, содержание пентоз 0,1 – 0,2 %. В винах специальных типов сахаров сусла остается больше. Количество пектиновых веществ резко снижается при брожении.
2) Резко изменяется содержание азотистых веществ. В процессе размножения дрожжи потребляют аммиачный азот и азот аминокислот. Содержание аминного азота уменьшается на 40 – 50 %, при этом глутаминовая, аспарагиновая и другие кислоты потребляются на 75 – 90 %, а содержание пролина не изменяется. По данным Эрлиха при спиртовом брожении дрожжи, дезаминируя аминокислоты, используют отщепляющий аммиак, а остаток аминокислот превращается в соответствующий спирт. По своей питательности аминокислоты можно разделить на 3 группы:
· аминокислоты, представляющие собой менее ценный (средний) источник азота: аланин, пролин, оксипролин;
· аминокислоты, являющиеся плохим источником азота: триптофан, гистидин, глицин, цистеин.
Согласно Стикленду, механизм дезаминирования аминокислот можно рассматривать как взаимодействие некоторых пар аминокислот между собой с образованием карбоновых кислот.
Установлено, что смесь из двух аминокислот ускоряет рост дрожжей на 19 %, из трех на 28 %, из восьми на 50 %.
Наряду с потреблением азота в процессе брожения происходит выделение в сусло азотистых веществ, в основном аминокислот. Винные дрожжи выделяют две аминокислоты: серин и глутаминовую. К концу брожения начинается автолиз, который продолжается на стадии формирования вина. При автолизе в вино также переходят ферменты, пуриновые и пиримидиновые основания.
По мере накопления этилового спирта при брожении осаждается часть белковых веществ и азотосодержащих танатов, а также соли винной кислоты.
Так как роль азотистых соединений в формировании вина велика, то регулирование их количества очень важно. Регулирующие факторы – температура и аэрация. По данным Нилова и Валуйко, наименьшее количество азотистых веществ в виноматериалах получается при брожении сусла в интервале температур . При температуре , и свыше содержание азотистых веществ увеличивается. При низких температурах ввиду слабого брожения расход азотистых меньше, поэтому их больше переходит в вино. При высокой температуре повышается за счет автолиза к концу брожения. Сбраживание сусла в условиях аэрации резко снижает содержание азотистых веществ при любых температурах.
3) Фенольные соединения вначале и в конце брожения окисляются кислородом и выделяются в осадок. Содержание антоцианов снижается на 40 %. Фенольные соединения взаимодействуют с белками, образуя танаты (осадок). Фенольные соединения связывают частично ацетальдегид, обуславливая, тем самым, глицеринопировиноградное брожение. Так, в кахетинских винах накапливается до 10 г/л глицерина. Фенольные соединения способны тормозить брожение при содержании более 5 г/л.
4) Превращения кислот могут быть как окислительного характера, так как винные дрожжи способны окислять органические кислоты (уксусную, янтарную, яблочную, лимонную), так и по циклу Кребса (цикл ди- и трикарбоновых кислот). Часть кислот (щавелевой и винной) удаляется в виде кальциевых и калиевых солей при накоплении спирта и уменьшении их растворимости в этом случае.
5) Изменение активности ферментов. Исследования Родопуло показали, что активность окислительных ферментов при брожении снижается, и на пятый день равна нулю. До 20 % о – дифенолоксидазы адсорбируется дрожжами, 80 % инактивируется при брожении за счёт появления в бродящем сусле цистеина и глютатиона, связывающих тяжёлые металлы, в ходящие в состав о – дифенолоксидазы. При брожении сусло обогащается протеиназами и - фруктофуранозидазой. Обогащение вина ферментами дрожжей считается положительным явлением и в практике виноделия с этой целью специально оставляют вино после брожения на дрожжевой гуще для удаления контакта его с дрожжами.
6) В начальный период брожения наблюдается поглощение витаминов дрожжами, затем при автолизе происходит обратный переход их в вино. Содержание мио – инозита не изменяется, а сами дрожжи способны синтезировать п – аминобензойную кислоту, холин и В12.
Изменения химического состава сусла в процессе брожения приводят к изменению его физико-химических и теплофизических характеристик. В результате брожения снижается плотность вин, уменьшается вязкость и поверхностное натяжение, увеличивается теплопроводность и теплоёмкость. Интенсивное выделение СО2 приводит к удалению летучих веществ (эфирных масел), что обедняет вина ароматическими веществами. В период бурного брожения окислительно-восстановительный потенциал падает, так как кислород интенсивно поглощается дрожжами (от 350 до 100 мВ). В заключительный период вследствие диффузии кислорода воздуха и прекращения выделения углекислоты окислительно-восстановительный потенциал вновь начинает медленно повышаться.
Формирование вина
Стадия формирования вина включает период от конца брожения и до первой переливки, момента осветления вина. На этой стадии продолжаются автолитические процессы, в вино переходят азотистые вещества, витамины и ферменты. Иногда контакт молодого вина с дрожжами продлевают, выдержка при этом осуществляется при температуре и рН не больше 3. Этот приём предложен Фроловым – Багреевым для приготовления «лизатных» (обогащенных продуктами распада дрожжей) виноматериалов, применяемых для приготовления шампанского.
Наблюдаются количественные и качественные изменения органических кислот, большое значение имеет яблочно-молочнокислое брожение. Это брожение проявляется в исчезновении яблочной кислоты и накоплении молочной (выход 60 %), сопровождается образованием пировиноградной кислоты, диацетила, ацетоина и 2,3 – бутиленгликоля. Вызывается молочно-кислыми лактобактериями.
Яблочно-молочное брожение. Предполагают три направления:
3
При яблочно-молочном брожении полностью исчезает аргинин, появляется орнитин. Например, после 16 недель яблочно-молочнокислого брожения содержание аргинина снижается от 816 мг/дм3 до 0, а содержание орнитина возрастает от 23 до 632 мг/дм3.
В результате яблочно – молочного брожения повышается рН вина, так как степень диссоциации молочной кислоты ниже, чем яблочной. Исчезает резкая кислотность и вкус более гармоничный и мягкий. Яблочно – молочное брожение нежелательно для малокислотных и плоских вин. Молочно-кислые бактерии разделяют на хомоферментативные и гетероферментативные. Первые образуют только молочную кислоту, вторые, помимо, молочной кислоты способны синтезировать диацетил и ацетоин, ухудшающие вкус. Поэтому в виноделии, чтобы искусственно вызвать яблочно-молочнокислое брожение, рекомендуется использовать чистую культуру гомоферментативных молочнокислых бактерий.
К концу периода формирования вина с выделением СО2 , доступ кислорода облегчается, усиливаются окислительно-восстановительные процессы. Взвешенные частицы, а также образовавшиеся танаты и виннокислые соли выделяются в осадок и вино осветляется.