Методы определения гомогенности белков

Степень чистоты выделенного белка определяется:

ü ультрацентрифугированием;

ü методом диск - электрофореза;

ü различными иммунохимическими методами;

ü определением растворимости белка (метод Нортропа) основан на правиле фаз, согласно которому растворимость чистого вещества при данных условиях опыта зависит только от температуры, но не зависит от концентрации вещества в твердой фазе.

Если белок гомогенный, то на графике получается один перегиб (а), если есть примеси белков (б, в), то получим несколько перегибов кривой насыщения. У всех белков свои индивидуальные кривые растворимости.

ЛЕКЦИЯ 4

НУКЛЕИНОВЫЕ КИСЛОТЫ

В 1868 г. швейцарский ученый Ф. Мишер выделил из ядер лейкоцитов вещество, названное им нуклеином (от греч. nucleus – ядро). В 20-м столетии стало известно химическое строение нуклеина – его назвали ДНК. Позднее открыли и РНК. Мишер определил, что нуклеин содержит большое количество Р, нуклеин обладал выраженными кислыми свойствами. К середине 20 в. было обнаружено, что нуклеиновые кислоты в организме находятся в комплексе с белками, то есть в виде нуклеопротеидов и участвуют в передаче наследственных признаков.

Состав нуклеиновых кислот

АО
производные пурина	производные 2-оксопиримидина
Аденин А (6-аминопурин) Гуанин Г (G) (2-амино-6-оксопурин)	Цитозин Ц, С (2-оксо-4-аминопиримидин) Урацил У, (U) (2,4-диоксопиримидин) Тимин Т (5-метил-2,4-диоксопиримидин)

Кроме главных АО, в нуклеиновых кислотах встречаются минорные пуриновые и пиримидиновые АО (гидроксилированные и метилированные) – до 10% всех нуклеотидов – Т-РНК. В ДНК они встречаются реже.

дигидроурацил	псевдоуридин

Углеводная часть

рибоза (b-Д-рибофураноза) – в составе РНК	дезоксирибоза (b-Д-2¢-дезоксирибофураноза) – в составе ДНК

Нуклеиновые кислоты (НК) бывают двух типов: ДНК и РНК.

Мономерным звеном нуклеиновых кислот являются мононуклеотиды, которые состоят из 3-х компонентов: азотистого основания (АО), углеводной части и остатка фосфорной кислоты.

Состав нуклеиновых кислот

Дезоксирибоза

Таким образом, звеном нуклеиновых кислот являются мононуклеотиды, состоящие из трех химически связанных компонентов. Соединение АО с сахаром называется нуклеозидом. Он образуется из мононуклеотида путем отщепления Н3РО4 при гидролизе или под воздействием специфических факторов.

Соединение этих трех компонентов происходит за счет b-N-гликозидной связи N¹- пиримидинового или N⁹ пуринового азотистого основания с С^1¢ атома пентозы и за счет сложноэфирной связи С^5¢ атома пентозы и фосфорной кислотой.

5¢-цитидиловая кислота цитидин-5¢-фосфат (5¢-дезоксицитидиловая) 5¢-уридиловая 5¢-адениловая 5¢гуаниловая	ЦМФ (5¢-дезоксицитидиловая) (5¢-дезоксиадениловая) (5¢-дезоксигуаниловая)

Если нуклеозид соединяется 1, 2 или 3 атомами Фн, то мононуклеозид называется соответственно цитидинмонофосфат – ЦМФ, цитидиндифосфат – ЦДФ, цитидинтрифосфат – ЦТФ

Первичная структура нуклеиновых кислот – это порядок, последовательность расположения мононуклеотидов в полинуклеотидные цепи ДНК или РНК, соединенных между собой 3¢5¢-фосфодиэфирной связью.

Поиск по сайту: