В организме человека ПВК образуется в процессе обмена углеводов в качестве промежуточного продукта. В норме в плазме крови содержится 0,8-1,5 мг % ПВК. При усилении гликолиза происходит накопление пирувата и лактата в крови, что сопровождается обычно изменением кислотно-основного состояния, уменьшением щелочных резервов. Увеличение содержания лактата и пирувата в крови может наблюдаться также при поражении паренхимы печени (поздние стадии гепатита, цирроз печени) в результате торможения процессов гликонеогенеза в печени. Повышенное количество лактата и пирувата в крови обнаруживается при болезни Гирке чаще всего встречающегося гликогеноза. При авитаминозе и гиповитаминозе В1 в крови и в других тканях, особенно в мозгу, ПВК накапливается в большом количестве. За сутки с мочой выделяется до 200 мг ПВК.
Принцип работы: ПВК с 2,4 – динитрофенилгидразином образует окрашенное соединение 2,4 – динитрофенилгидразон ПВК.
2,4- ДНФ-гидразин ПВК – желто-оранжевого цвета интенсивность его пропорциональна концентрации ПВК и определяется фотометрически.
Ход работы. Берем 2 пробирки, в контрольную пробирку наливаем по 1 мл воды, в опытные по 1 мл мочи, разбавленной в 2 раза. Затем во все пробирки приливаем по 1 мл 2,5% р-ра КОН, перемешиваем прибавляем по 0,5 мл 1% раствора ДНФГ и оставляем на 15 мин. Фотометруем с синим сфетофильтром.
Расчет. Проводим по калибровочному графику, найденную величину умножают на суточный диурез (1500 мл для мужчин, 1200 у женщин) и получаем количество ПВК в суточной моче.
КДЗ ПВК и лактата: В крови практически здоровых взрослых людей содержится от 0,0456 ммоль/л (45,6 мкмоль/л, 4 мг/л) – 0,0912 ммоль/л, 8 мг/л) ПВК. Содержание ПВК увеличивается при гипоксических состояниях, вызванных тяжелыми сердечно-сосудистой, легочной недостаточностью, анемией, остром гепатите, инсулиновой зависимости, сахарном диабете, после введения камфоры, стрихнина и при увеличении физической нагрузки уменьшается до 0,57 ммоль/л и ведет к судорогам. Увеличение уровня ПВК приводит к В1-витаминной недостаточности, токсическое действие аспирина вызывает в большой дозе метаболический ацидоз, отравление тяжелыми металлами. Все факторы обуславливающие увеличение концентрации ПВК обычно приводят к увеличению уровня молочной кислоты. Уровень лактата (МК) в крови увеличивается при гипоксическом состоянии, вызванном развивающимися множественными кровотечениями, острой застойной сердечной недостаточностью. Особенно много МК накапливается в воспалительных клетках, остром гепатите, инфекционной эпилепсии, увеличении мышечных нагрузок.
Норма МК в крови составляет 1,0135 ± 0,072 ммоль/л, при выше перечисленных состояниях увеличивается соотношение МК-ПВК, чаще оно составляет 10:1. Норма ПВК составляет 284,2 ммоль/сут или 25 мг/сут.
Контрольные вопросы
1. Напишите уравнение обратной лактатдегидрогеназной реакции, перерисуйте схему цикла Кори.
2. Разбнритесь в механизме работы ПДК. Зарисуйте схему процесса.
3. Уясните биохимические механизмы формирования и компенсации кислородной задолжности.
4. Почему после тяжелой физической работы у нетренированных людей появляется одышка?
5. Какие Вы знаете виды декарбоксилирования ПВК? В чем их сущность?
6. В чем сущность механизма пируватдегидрогеназной реакции?
7. Какие коферменты и ферменты участвуют в пируватдегидрогеназной реакции?
8. Почему липоевая кислота является центральным звеном окислительного декарбоксилирования пирувата?
9. Как регулируется ПДК в организме человека?
10. Почему и как по лактату в артериальной и венозной крови можно судить о метаболическом состоянии органа (например мозга)?
11. Какой процесс называют циклом лимонной кислоты или ЦТК? Почему?
12. Какова роль щавелево-уксусной кислоты (ЩУК) в механизме ЦТК? Напишите формулу ЩУК?
13. Каков механизм синтеза ЩУК?
14. Напишите уравнение реакции ЦТК: а) до α – кетоглутаровой к-ты, б) от α – кетоглутаровой кислоты до ЩУК.