Помощничек
Главная | Обратная связь


Археология
Архитектура
Астрономия
Аудит
Биология
Ботаника
Бухгалтерский учёт
Войное дело
Генетика
География
Геология
Дизайн
Искусство
История
Кино
Кулинария
Культура
Литература
Математика
Медицина
Металлургия
Мифология
Музыка
Психология
Религия
Спорт
Строительство
Техника
Транспорт
Туризм
Усадьба
Физика
Фотография
Химия
Экология
Электричество
Электроника
Энергетика

Методы определения лекарственной чувствительности



Фенотипические:

· Культуральные – при задержке роста на плотных или жидких средах в присутствии антибактериального препарата;

· Молекулярные – без культивирования, например, по маркёрам изменений в метаболизме бактерий;

Генотипические:

· Выявление специфических для каждого антибактериального препарата генных мутаций после амплификации (ПЦР) соответствующего участка ДНК.

Культуральное определение чувствительности М. tuberculosis к противотуберкулёзным препаратам

· Классические методы, такие как метод абсолютных концетраций или метод пропорций, выполняются на плотных средах, содержащих противотуберкулёзные препараты.

· Системы бульонного культивирования ВАСТЕС 460, ВВL MGIT, ВАСТЕС 960, МВ /ВасТ - препараты растворяются в бульоне.

Цель исследования ЛЧ состоит в том, чтобы определить отличается ли клинический изолят от «дикого» штамма МБТ по степени чувствительности к соответствующему антимикробному агенту:

· При оценке результата микробиологического исследования культура МБТ признаётся устойчивой, если микобактерии дают рост на питательной среде в присутствии критической концентрации заключённого в неё противотуберкулёзного препарата.

· Критическая концентрация – это самая низкая концентрация, которая подавляет рост 95% «диких» штаммов МБТ.

· Для каждой среды или системы культивирования подобраны соответствующие критические концентрации препаратов.

Метод абсолютных концентраций (метод разведений на плотной или жидкой питательных средах)

Набор пробирок:

· С питательной средой, модифицированной противотуберкулёзными препаратами разных концентраций;

· Контрольной пробирки без препарата;

· Пробирки, содержащей препарат для выявления роста нетуберкулёзных микобактерий.

Интерпретация результатов

· Чувствительная культура – при наличии < 20 колоний (при том, что имеется обильный рост на контрольной пробирке без препаратов)

· Устойчивая культура – при наличии > 20 колоний

Метод пропорций на плотных средах

Принцип: выявление процента бактерий, устойчивых к критической концентрации лекарственного препарата

Метод: сравнение числа колоний, выросших в присутствии лекарственного препарата, с числом колоний в контроле

Критерий оценки: устойчивость – более 1% по сравнению с числом колоний в контроле

Два подхода:

1. Непрямой метод: заражение чистой культурой

2. Прямой метод: заражение мокротой (БК+)

Непрямой тест

· Выполняется с бактериальной суспензией, приготовленной из первично изолированной культуры

· Преимуществом непрямого метода является возможность точно калибровать культуру, используя оптический стандарт мутности, поскольку результаты прямого метода в некоторых случаях не могут быть оценены из-за избыточного или из-за неудовлетворительного роста на контрольной среде без препарата.

Прямой тест

· Предусматривает инокуляцию бактериоскопически положительного материала непосредственно в среду, содержащую противотуберкулёзный препарат

· Преимущество: сокращение времени диагностики

· Недостаток: микробная контаминация, которая более часто наблюдается и может исказить оценку результатов.

Системы с использованием жидких питательных сред

Общие черты:

1. Автоматизированы полностью или частично

2. Ускоренное выявление роста бактерий (7-14дней) – по выделению СО2 или по поглощению кислорода

3. При выделении культуры из мокроты добавляют комплекс антибиотиков для задержки роста контаминантов, что делает среду селективной

4. Определение лекарственной чувствительности – к препаратам 1-го ряда, непрямым методом, с использованием критических концентраций (для каждой системы)

5. Ответ лаборатории (с момента получения мокроты)- через 2-4 недели (включая выделение культуры)

Сроки выделения культуры возбудителя туберкулёза

· Классический метод – 19-81 день (45,62)

· ВасtесТМ МGITTM 960 – 5-22 дня (12,95)

Разница в 3,52 раза

Сроки определения лекарственной чувствительности

· Классический метод – 21-28 дней (22,75)

· BactecTM MGITTM 960 – 5-11 дней (8,49)

Разница в 2,68 раза




©2015 studopedya.ru Все права принадлежат авторам размещенных материалов.