 |
|
|
Архитектура Астрономия Аудит Биология Ботаника Бухгалтерский учёт Войное дело Генетика География Геология Дизайн Искусство История Кино Кулинария Культура Литература Математика Медицина Металлургия Мифология Музыка Психология Религия Спорт Строительство Техника Транспорт Туризм Усадьба Физика Фотография Химия Экология Электричество Электроника Энергетика |
Спосіб, запропонований співробітниками Інституту тваринництва УААН
Одержання зародків Запліднення яйцеклітин відбувається у яйцепроводі. Зиготи, що утворилися, підлягають дробленню, і більшість з них у великої рогатої худоби потрапляють у матку на 4-й день. Зародки доцільно вилучати у корів на 7-8-й день, а у овець – на 5-6-й день після першого осіменіння (до звільнення зародку з прозорої оболонки). Для вилучення зародків використовують два способи: нехірургічний та хірургічний.
Перед вилученням зародків шляхом ректального дослідження підраховують число жовтих тіл в яєчниках корови-донора. Наявність 10 чи більше жовтих тіл вказує на хорошу реакцію тварини на гормональну обробку, менше 5 жовтих тіл – на слабку реакцію. Для проведення операції корову фіксують в станку в положенні стоячи. Бажано, щоб тазові кінцівки тварини знаходилися дещо вище передніх. Для попередження частої дефекації і зняття м’язової напруги роблять сакральну анестезію. В епідуральний простір між крижевою кісткою і першим хвостовим хребцем вводять 5 мл 2%-ного розчину новокаїну. Норовливим коровам вводять внутрішньомязево міорелаксант (рампун) 0,5-0,7 мл, чи маточний релаксант комбілен 0,7-1,0 мл, іліханегіф 10 мл, чи аміназин 5 мл. Теплою водою з милом миють зовнішні статеві органи і корінь хвоста, витирають паперовими Металевий катетер і перехідники стерилізують кип’ятінням, латексний катетер знезаражують в 96%-ному спирті, після чого промивають фосфатно-буферним середовищем для трансплантації зародків. В латексний катетер потім вставляють стерильний металевий стилет і фіксують в замковому вузлі катетера. Попередньо стилет змазують стерильним вазеліном чи вазеліновим маслом. Ззовні катетер також можна злегка змазати вазеліновим маслом, після чого його поміщають в захисний поліетиленовий чохол. Спочатку катетер в чохлі вводять в піхву по верхньому її склепінню і спрямовують в канал шийки матки. Притримуючи інструмент в такому положенні, зсовують поліетиленовий чохол назад, а катетер проводять під ректальним контролем через канал шийки матки в один з рогів матки (рис. 5). Для більш повного вилучення зародків необхідно, не травмуючи слизової оболонки, як можна глибше ввести інструмент в ріг матки. Після того як катетер досягне в розі матки необхідного положення, мандрен видаляють і в балончик катетера нагнітають 10-15 мл повітря. При цьому катетер фіксується в розі матки і промивна рідина не витікає мимо катетера. Закріпивши катетер, промивають порожнину рогу за допомогою шприца Люера місткістю в 50-60 мл. В ріг матки в залежності від його величини вводять порціями від 40 до 60 мл промивної рідини, витрачаючи на промивання кожного рогу не більше 500 мл. Наповнення матки промивним середовищем та ступінь його відтоку контролюють ректально. Для більш повного вилучення зародків верхівку рогу матки при піднімають і виправляють. Деякі автори рекомендують яйцепровід поблизу верхівки рогу матки обережно затиснути великим і вказівним пальцями. При цьому попереджається потрапляння в черевну порожнину рідини, що містить зародки. Однак практика показує, що потрапляння в черевну порожнину рідини з рогу матки відмічається лише при наявності значного тиску в матці, тому яйцепровід можна не затискувати. Після використання всього об’єму середовища (500 мл) в ріг матки можна ввести шприцом 30-40 мл повітря. Іноді вводять повітря два-три рази. Це необхідно для більш повного повернення середовища, що вводиться в матку. При цьому має значення і вміння спеціаліста контролювати стан матки рукою через пряму кишку. Відсутність великих втрат середовища (з 500 мл не більше 10-15 мл) та домішок в ньому крові вказує на достатньо технічне проведення операції. Коли буде завершено промивання одного рогу матки, повітря з балончика випускають і катетер видаляють із статевих шляхів. Інший підготовлений катетер вводять в інший ріг матки, і всю процедуру повторюють заново. Можна користуватися і одним катетером, переводячи його з одного рогу в інший. В якості середовища для промивання матки використовують фосфатно-сольовий буфер (ФСБ) Дюльбекко. ФСБ готують шляхом змішування трьох різних стерильних розчинів. Розчин ФСБ-А У 10 л деіонізованої бідистильованої води розчиняють: натрій хлористий 100 г калій хлористий 2,5 г натрій фосфорнокислий двозаміщений 12-водний, висушений до постійної маси 14,4 г калій фосфорнокислий однозаміщений 2,5 г
Буфер розливають по 400 мл в бутилі об’ємом 500 мл. Для стерилізації автоклавують при тиску 1 атм на протязі 20 хв. Зберігають при кімнатній температурі. Розчин ФСБ-Б В 1 л деіонізованої бідистильованої води розчиняють кальцій хлористий безводний, висушений до постійної маси 1 г. Для стерилізації автоклавують при тиску 1 атм на протязі 15 хв. Зберігають при кімнатній температурі. Розчин ФСБ-В В 1 л деіонізованої бідистильованої води розчиняють магній хлористий 6-водний, висушений до постійної маси 1 г. Для стерилізації автоклавують при тиску 1 атм на протязі 15 хв. Зберігають при кімнатній температурі. Для одержання повного ФСБ змішують 400 мл ФСБ-А з 50 мл ФСБ-Б і 50 мл ФСБ-В. В такому вигляді буфер можна зберігати при 4°С до 2 тижнів. Безпосередньо перед застосуванням в ФСБ вводять наступні компоненти (в розрахунку на 1 л): фетальну сироватку теляти – 10-20 мл, пеніциліин (калієва сіль) – 100 тис. ОД, глюкозу – 1 г, натрій піровино-граднокислий – 0,036 г. Після цього витримують в термостаті при температуре 37,5°С на протязі 1 год. і використовують для промивання матки. Завершивши промивання, катетер повністю не видаляють і через нього вводять в тіло матки 50-75 мл ФСБ, пеніцилін та стрептоміцин по 500 тис. ОД і тетрациклин 200 тис. ОД. Це необхідно для попередження ендометриту.
Вилучення зародків проводять при загальному чи місцевому знеболенні. Розрізають черевну стінку по білій лінії чи частіше в області голодної ямки справа чи зліва, оглядають статеві органи, підраховують кількість жовтих тіл в яєчниках, підтягують один з рогів матки до поверхні рани, роблять невеликий розріз поблизу його основи (тіла матки) і вставляють в його порожнину спеціальний катетер (частіше – катетер Фоллея) до згину у бік верхівки. Катетер з латексної гуми має основний канал діаметром 2-3 мм для відтоку промивної рідини і інший канал діаметром 0,5 мм для нагнітання повітря в гумовий балончик, що находиться на відстані 4-5 см від верхівки катетера. На передній частині катетера маються 2 отвори на різних рівнях для відтоку рідини. Гумовий балончик необхідний для попередження витікання рідини в тіло чи інший ріг матки. Після введення катетера і нагнітання повітря в балончик проколюють тупою голкою верхівку маткового рогу і вводять через прокол канюлю, через яку подають промивну рідину (60-120 мл). Для поліпшення результатів нерідко роблять тубо-маткове промивання. В цьому випадку канюлю вставляють в яйцепровід в ампулярну частину і подають промивну рідину (10-20 мл). Промивання яйцепроводів і матки дозволяє одержати більше 70% яйцеклітин і зародків від числа жовтих тіл, тоді як промивання лише матки – біля 45%. Однак промивання матки більш безпечне. У овець вилучення зародків хірургічним способом проводять через 40-80 год. після прояву перших ознак статевої охоти; можливе проведення операції і через 5-12 діб. В залежності від строків виконання процедури промивають різні ділянки статевих шляхів. В перші три доби промивання підлягають яйцепроводи, а іноді і кінцеву частину рогів матки; на 5-7-й день роблять змиви з великої частини рогів матки, а після 9-го дня – промивають всю матку. При вилученні зародків з яйцепроводу у лійку його вводять скляну трубочку (внутрішній діаметр 2 мм) на глибину до 3 см і вільний кінець її поміщають в маркірувальну чашку Петрі. Овечу сироватку (2 мл і більше) вводять за допомогою шприца в яйцепровід у місці з’єднання з матковим рогом, і всю рідину збирають. Якщо збирають зародки з рогу матки, тоді шприц чи канюлю вводять в ріг матки на відстань 4 см від тубо-маткового з’єднання і вільний кінець поміщають в ємність (чашку Петрі) для зародків. В просвіт матки в місці з’єднання з яйцепроводом шприцом вводять 2 мл сироватки. Щоб сироватка не втрачалася, ріг матки за канюлею чи шприцом перетискують рукою. Якщо зародки вилучають на 5-7-й день від початку охоти, то використовують 5-10 мл сироватки і роблять змиви з великої частини рогів матки. А для одержання бластоцист через 9 днів після початку охоти промивають всю матку. При цьому шийку матки перетискують затискувачем, сироватку вводять в верхівку одного рогу матки, а збирають її через канюлю, вставлену в протилежний яйцепровід. У овець до числа овуляцій одержують до 80% зародків. Хірургічний спосіб придатний для всіх видів тварин і людини, який дозволяє одержувати до 70 % життєздатних зародків, але для великої рогатої худоби і коней в наш час він застосовується головним чином з науковою метою. Він складний, працемісткий, потребує великих витрат, і тому на теперішній час його застосовують лише у мілких тварин (овець, кіз та ін.). Після операції у тварини значно знижується рівень молочної продуктивності, мається ризик втрати високоцінного донора при загальному знеболенні. Його не можна часто повторювати, так як у післяопераційний період утворюються спайки, з-за чого виникають труднощі у вилученні зародків, а потім можуть розвиватись незворотні зміни, що призводять до неплідності донорів(табл. 2). Таблиця 2 Порівняльна оцінка методів вимивання ембріонів
Поиск по сайту: |
При нехірургічному способі вилучення зародків тварин фіксують в станку. Прямую кишку звільнюють від вмісту і проводять ретельне ректальне дослідження. Визначають скільки жовтих тіл знаходиться в кожному яєчнику. Хвіст фіксують. Проводять туалет і дезинфекцію зовнішніх статевих органів та промежини. Для припинення перистальтики прямої кишки епідурально вводять 10 мл 2%-ного розчину новокаїну.
Для вимивання зародків з матки застосовують різні інструменти. Частіше використовують двох- чи трьохходові катетери (типу Фоллея) з латексної гуми з пружним мандреном і надувним балончиком (рис. 3.) чи телескопічний комбінований трьоходовий інструмент з внутрішнім еластичним катетером, що висувається, французької фірми IMV (рис. 4).
серветками чи ватними тампонами.
При хірургічному вилученні зародків тварину не годують 1-1,5 доби і не поять 5-6 год. Для хірургічного видалення ембріонів кор стуються двоканальним з надувною кулькою катетером Фолея № 14, виготовленим з латексної гуми, та спеціальною тупою голк в пластмасовому чохлі, яка застосовується у медицині для перереливання крові (рис. 6). Найбільше використовують для нехірургічного видалення ембріонів двоканальний катетер західнонімецької фірми «Руш Нейштадт» і триканальний катетер французької фірми ІMB.