Согласно рекомендациям ВОЗ, клиническая диагностика ВИЧ-инфекции возможна при наличии одного из 12 СПИД -индикаторных заболеваний. Наличие одного из них позволяет диагностировать ВИЧ-инфекцию при отсутствии серологического иммуноферментного исследования крови или даже при получении серонегативного результата. О ВИЧ-инфекции необходимо думать, если у больного имеются определенные клинические симптомы, тем более ,если имеются эпидемиологические предпосылки ( лица из групп риска, указание на переливание крови).
По мнению CDC,наиболее объективный критерий – количество CD4-лимфоцитов,а не клинические проявления,так как многие из симптомов встречаются у лиц,не инфицированных ВИЧ.Постановка диагноза СПИД может быть в случае,если
А) у инфицированного имеется одно из СПИД-ассоцииированных состояний или
Б)он ВИЧ-инфицирован и имеет менее 200 CD4 -клеток /мм.
Лабораторная диагностика ВИЧ -инфекции базируется на трех направлениях :
1. - индикация ВИЧ и его компонентов,
2. - выявление анти- ВИЧ,
3. - определение изменений в иммунной системе.
Наиболее распространенные методы – серологические. Методом ИФА и иммунного блота выявляют антитела к антигенам вируса. Антитела к ВИЧ в крови появляются у большинства, начиная от трех недель до трех месяцев после инфицирования вирусом. Их в дальнейшем можно почти всегда обнаружить, несмотря на то ,что вирус в какой-то мере подавляет выработку антител.
Методом ИФА выделяют суммарные антитела к белкам ВИЧ. Метод специфичен ( 99%) и чувствителен (93-99%), позволяет выявлять вирусспецифические антитела у 95% инфицированных. Отрицательные 5% случаев приходятся на ранние этапы инфицирования, когда антител еще мало в сыворотке крови, или на терминальные фазы болезни, когда организм уже не в состоянии синтезировать антитела в силу резкого истощения иммунной системы.
Кроме того, в ходе инфекционного процесса наблюдаются периоды исчезновения антител из крови, что также обусловливает отрицательные результаты ИФА. Наоборот, возможны ложноположительные данные ИФА, в основном у больных с аутоимунными заболеваниями, при инфекции, вызванной вирусом Эпштейна-Барр, когда происходит перекрестная реакция антител к ревматоидному фактору, вирусу Эпштейна-Барр или молекулам главного комплекса гистосовместимости.
Встречаются подобные ложноположительные реакции в 0,02- 0,5% случаев.
Сейчас внедрены в практику тест-системы 3-4 поколения, в основе которых лежит использование в качестве антигена :
а) лизатов ВИЧ-1,
б) рекомбинантных белков ВИЧ-1,
в) антигенов субтипов «О» ВИЧ-1,
г) коньюгат, позволяющий определять IgM, IgG, Ig A.Все это снижает частоту ложноположительных реакций ИФА при диагностике ВИЧ- инфекции, дает возможность раннего выявления сероконверсии.
Улучшение тест-систем, выпускаемых некоторыми фирмами, обусловило высокую чувствительность, чем иммунный блот, используемый для подтверждения специфичности ИФА. Поэтому ИФА с некоторыми тест-системами может использоваться не только как метод для скрининговых исследований, но и как подтверждающий их.
Антитела к внутренним белкам ( р17,р24) обнаруживаются у ¾ инфицированных и примерно у половины больных СПИДом.
Иммуноблот используется при диагностике ВИЧ-инфекции в качестве экспертного метода. ИБ сочетает в себе определение антител к отдельным белкам вируса с предварительным переносом на нитроцеллюлозную полоску ( стрип) антигенов. В ИБ чаще всего выявляются антитела против gр 41,обнаружение же в ИБ антител против р24 при профилактических обследованиях не дает оснований для окончательного решения фопроса об инфицировании. Используемый в последнее время рекомбинанатный белок для ИБ улучшает оценку результатов. У больных ВИЧ-инфекцией в иммунном блоте во всех случаях выявляются антитела к gр160 и лишь у трети – к р 15.
ВОЗ предлагает следующий принцип оценки результатов иммунного блота :
а)положительный результат – обнаружение в сыворотке крови антител к вирусным белкам из группы env с наличием или отсутствием белков – продуцентов gag и pol;
б) отрицательный результат –отсутствие каких-либо антител,
.в) неопределенный результат – обнаружение в сыворотке крови антител к белкам из группы gag и pol.Чаще всего неопределенный результат связан с белками – продуцентами экспрессии гена gag ВИЧ-1 р15/17,р24,р55,так как в этих случаях возможны или инфицирование или ложноположительные результаты.
В подобных случаях, если обследуемый не относится к группе риска, а повторный анализ не дает нарастания титра антител, скорее всего, человек не инфицирован.Окончательное решение вопроса о диагнозе возможно только при проведении более высокочувствительных, экспертных методов исследования : пероксидазной цепной реакции, ДНК-зондов,культивирования вируса.
Лаборатороная диагностика осуществляется в 2 направлениях
- установление фактора инфицированности
- прогноз эффективности лечения
Для определения ВИЧ-инфицированности используют показатели
- наличие антител к ВИЧ
- наличие антигенов ВИЧ и ДНК провируса
Антигены ВИЧ и антитела определяют методом ИФА.
В стадии инкубации у большинства инфицированных в течение длительного времени репликация вируса либо отсутствует, либо не достигает необходимого уровня для образования антител. Именно в это время возможно определение ДНК провируса в геноме клеток.
В стадии первичных проявлений заболевания может возникать виремия и и, следовательно, антигенемия. Происходит образование IgM, IgG к белку вируса. Этот процесс начинается со 2 недели после заражения. Затем в течение 2-4 недель уровень антител возрастает и сохраняется несколько недель для М и несколько лет для G.
Антитела к ВИЧ появляются у 90-95% в течение 3-х месяцев после заражения. Трудности с выявлением антител могут возникать в период вирусемии и антигенемии, когда антитела израсходованы на связывание с антигеном.Обнаруживаются,как правило, у 50-6-% больных, в течение 5 месяцев – у 0,5-1,0%.
Наиболее часто снижение уровня антител к ВИЧ происходит в терминальной стадии. Специфические маркеры ВИЧ определяют в 3 этапа :
1. - скрининг
2. - референсный
3. - экспертный
Лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции у человека может осуществляться следующими методами:выявление антител к вирусу или его отдельным антигеном (ИФА к ВИЧ