Изучить способы выделения вирусов из биологических материалов.

ИНСТРУКЦИЯ К ПРАКТИЧЕСКОМУ ЗАНЯТИЮ №16

ТЕМА: «Ознакомление с принципами лабораторной диагностики вирусных инфекций»

Задачи:

Ø Изучить методы выявления вирусов.

Ø Сформировать понятие о принципах диагностики вирусных инфекций, патогенезе, специфической профилактике вирусных инфекций.

Ø Научить подбирать препараты для специфической профилактики вирусных инфекций

ЗАДАНИЕ № 1

Изучить микробиологическую диагностику вирусных инфекций

Лабораторная диагностика вирусных инфекций человека основана:

1) на прямых микроскопических методах обнаружения вирионов в патологических материалах; 2) серотипаже (идентификации) чистых культур вирусов, выделенных из них; 3) серодиагностике, т.е. косвенном способе определения вирус специфических антител в сыворотке крови. При этом: материалы исследуются в иммерсионном, люминесцентном и электронном микроскопах; культуры вирусов получают, инфицируя материалами чувствительных к ним линии клеток, куриные эмбрионы и животных; идентификацию вирусов и определение вирусоспецифических антител осуществляют в серологических реакциях.

Патологические материалы и их обработка. Материалами, в которых содержатся вирусы, могут являться: кал, моча, мокрота, носоглоточные смывы, содержимое высыпаний на коже и слизистых оболочках и прочие экскреты; кровь, спинномозговая жидкость, пунктаты плевральной и брюшной полости, суставов, увеличенных лимфатических узлов и другие секреты. От умерших людей и погибших животных берут пораженные вирусами органы и ткани. Здесь нужно отметить, что взятые для исследования материалы при необходимости подвергаются специальной обработке для приготовления мазков и гистологических препаратов, а при инфицировании культур клеток, эмбрионов и животных – измельчаются, отстаиваются, фильтруются, осветляются концентрируются и обрабатываются антибиотиками, которые уничтожают постороннюю (банальную) микрофлору, в большом количестве находящуюся в экскретах.

Подготовительный этап:

1. Подготовить рабочее место согласно правил работы в вирусологической лаборатории.

2. Подготовить емкости с дез.растворами для обеззараживания предметов, используемых в процессе работы, согласно инструкции.

Основной этап:

ЗАДАНИЕ № 2

Изучить микроскопический метод обнаружения вирусов

Исследуются два микроскопических способа выявления вирусов в материалах – вирусоскопия в иммерсионном и люминесцентном микроскопах и электронная микроскопия.

Вирусоскопия. В иммерсионном световом микроскопе обнаруживаются самые крупные вирусные включения.

Схематическое изображение вирусных включений

1 – вирусные включения в клетке , зараженной вирусом оспы;

Включения в цилиндрическом эпителии, зараженном вирусом гриппа

Включения в эпителии, зараженном реовирусом

Тельца Бабеша-Негри в нейроцитах (бешенство)

Внутриядерные включения в эпителии, зараженном герпес- и аденовирусом

Внутриядерные и цитоплазматические включения в эпителии, зараженном вирусом кори

По форме, размерам, структуре, отношению к красителям все эти и другие вирусные включения строго специфичны.

Электронная микроскопия. В электронном микроскопе вирусы идентифицируют по тонким деталям их ультраструктуры. С этой целью получают микрофотографии.

ЗАДАНИЕ № 3

Изучить способы выделения вирусов из биологических материалов.

Чаще всего вирусы выделяют из патологических материалов в культурах клеток и куриных эмбрионах, реже их культивируют в организме экспериментальных животных.

Выделение вирусов в культурах клеток. В большинстве случаев вирусы человека и животных выделяют на первичных культурах почек эмбрионов человека и обезьян. При этом исследуемым материалом заражают культуры клеток, в которых под малым увеличением микроскопа наблюдается хороший рост клеток.

Выделение вирусов в курином эмбрионе. Для выделения вирусов из материалов используются, главным образом, 7-11 - дневные эмбрионы белых кур. Заражение производят на хорионаллантоисную оболочку (ХАО), в аллантоисную и амниотическую полости, желточный мешок и тело зародыша. При этом выбор пути инфицирования определяется специфическими свойствами вирусов. Перед заражением яйцо помещают в овоскоп и, установив жизнеспособность эмбриона и границы воздушного мешка, спиртом и йодом обрабатывают скорлупу. Сбоку от воздушного мешка ножницами снимают скорлупу и слегка надрывают скорлупную оболочку. Затем прокалывают ХАО и погружая иглу на 1-2 мм шприцем вводят 0,1-0,2 мл материала в аллантоисную полость. Таким же путем можно заразить эмбрион в желточный мешок. Зараженные эмбрионы помещают в термостат, в котором поддерживается определенная влажность. Время инкубации эмбриона и температурный режим зависят от свойств исследуемого вируса. Размножаясь в курином эмбрионе вирусы, вызывают задержку развития эмбриона и его гибель.

Выделение вирусов в организме животных. В организме животных культивируют те вирусы, которые плохо или совсем не размножаются в культурах клеток и курином эмбрионе. При этом материалом предпочтительнее заражать мышей, а в случаях, требующих выделения онкогенных вирусов, белых крыс и сирийских хомяков.

ЗАДАНИЕ № 4

Поиск по сайту: