Тема: «Бактериологический метод исследования. Исследование на бактерионосительство золотистого стафилококка у студентов фармацевтического факультета (2 этап)».

Кафедра микробиологии им. доц. Б.М. Зельмановича

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ДЛЯ ОБУЧАЮЩИХСЯ

По дисциплине «микробиология»

Для специальности 060301 – Фармация (очная форма обучения)

К ЛАБОРАТОРНОМУ ЗАНЯТИЮ № 5

ТЕМА: «Бактериологический метод исследования. Исследование на бактерионосительство золотистого стафилококка у студентов фармацевтического факультета (2 этап)»

Утверждены на кафедральном заседании

протокол № ____ от «___»____________ 20__ г.

Заведующий кафедрой

к.б.н., доцент_________________ Перьянова О.В.

Составители:

к.б.н., доцент_________________ Перьянова О.В.

к.б.н., доцент_________________ Хохлова О.Е.

Красноярск

Занятие № 5

Тема: «Бактериологический метод исследования. Исследование на бактерионосительство золотистого стафилококка у студентов фармацевтического факультета (2 этап)».

2. Форма организации занятия:лабораторное занятие.

3. Значение изучения темы: выявление бактерионосительства золотистого стафилококка у сотрудников аптек проводится путем их выделения. Для этого необходимо получить изолированные колонии на чашках первичного посева, которые, являясь результатом размножения одной клетки, содержат микроорганизмы одного вида.

4. Цели занятия:

- общая: обучающийся должен обладать ОК: способностью и готовностью анализировать социально-значимые проблемы и процессы, использовать на практике методы медико-биологических наук в различных видах профессиональной и социальной деятельности (ОК-1) и ПК: способностью и готовностью работать с научной литературой, анализировать информацию, вести поиск, превращать прочитанное в средство для решения профессиональных задач (выделять основные положения, следствия из них и предложения) (ПК-48);

- учебная: знать цель и последовательность работы на II этапе бак. метода; тактику изучения колоний; понятие «чистая культура» микроорганизмов;

уметь описать характер роста колоний на плотной питательной среде (культуральные свойства микроорганизмов); изучить морфологические и тинкториальные свойства бактерий в фиксированных препаратах из отобранных колоний; провести посев характерных изолированных колоний на скошенный питательный агар;

владеть навыками интерпретации результатов бактериологического метода диагностики.

5. План изучения темы:

5.1. Контроль исходного уровня знаний:

Собеседование по контрольным вопросам:

1. Цель и последовательность работы на II этапе бак. метода.

2. Тактика изучения колоний.

3. Понятие «чистая культура» микроорганизмов.

Тесты.

1. Для первичного посева отделяемого из носа при диагностике бактерионосительства золотистого стафилококка используют:

а) среду Эндо

б) МПА

в) МПБ

г) желточно-солевой агар (ЖСА)

д) кровяной агар (КА)

2. Исследуемый материал при выявлении бактерионосительства золотистого стафилококка у аптечных работников:

а) смывы с рук

б) желчь

в) кровь

г) отделяемое из носа

д) слюна

3. Цель II этапа бак. метода:

а) идентификация чистой культуры

б) отбор изолированных колоний

в) накопление чистой культуры

г) посев исследуемого материала

д) определение антибиотикограммы исследуемой культуры

4. Культуральные свойства бактерий:

а) морфология бактерий

б) способность воспринимать краситель

в) тип метаболизма

г) морфология колоний

д) интенсивность метаболизма

5. Цель посева изолированных колоний на скошенный агар:

а) идентификация бактерий

б) разобщение бактерий

в) накопление чистой культуры

г) изучение подвижности

д) получение изолированных колоний

6. Изучение колоний при малом увеличении (x8) позволяет определить:

а) морфологию микроорганизмов

б) структуру

в) цвет

г) консистенцию

д) прозрачность

7. Основной механизм поступления питательных веществ в бактериальную клетку:

а) пассивная диффузия

б) облегченная диффузия

в) активный транспорт

г) фагоцитоз

д) пиноцитоз

8. Факторами роста микроорганизмов являются все соединения, к р о м е:

а) аминокислот

б) пуринов

в) пептонов

г) пиримидинов

д) витаминов

9. Интенсивность роста S. aureus на ЖСА, свидетельствующая о наличии бактерионосительства:

а) отсутствие роста

б) единичные колонии (10-25)

в) значительный рост (до 100 колоний)

г) сливной рост или сплошной рост изолированных колоний

д) единичные колонии (1-5)

10. По типу питания бактерии, вызывающие инфекционные заболевания, являются:

а) факультативными анаэробами

б) фотоаутотрофами

в) хемоаутотрофами

г) фотогетеротрофами

д) хемогетеротрофами

11. Компонент ЖСА, определяющий её элективность для выделения золотистого стафилококка:

а) яичный желток

б) хлористый натрий

в) пептон

г) питательный бульон

д) дистиллированная вода

Составители тестов:

зав. кафедрой, доцент Перьянова О.В.

ст. преподаватель Степанова А.И.

Основные понятия и положения темы

Одной из мер профилактики контаминации лекарственных средств и оборудования в условиях аптеки является выявление носителей золотистого стафилококка среди персонала с последующей санацией. При проведении бактериологического обследования обязательным является исследование слизи из передних отделов носа; исследование слизи из зева проводят выборочно, прежде всего, при наличии воспалительных процессов в зеве.

5.3. Самостоятельная работа по теме:

1. Провести II этап бак. метода (продолжение исследования по выявлению бактерионосительства золотистого стафилококка у студентов фармацевтического факультета):

1.1. изучить посевы и отобрать характерные изолированные колонии;

1.2. приготовить, окрасить по Граму и промикроскопировать мазок из части колонии;

1.3. оставшуюся часть колонии отсеять на скошенный агар.

· Занести в протокол полученные результаты.

Методические указания к выполнению исследовательского задания:

1. Проведите II этап бакметода выделения аэробов с целью установления бактерионосительства золотистого стафилококка:

1.1. Просмотрите чашки, отберите изолированные колонии, обведя их контуры стеклографом со стороны дна чашки.

Исследование отобранных изолированных колоний проводят по следующей схеме:

Макроскопическое изучение колоний:

· в проходящем свете (чашку держат дном к себе):

а) форма (круглая, неправильная и т.д.);

6) величина (точечные - менее 1 мм, мелкие — 1-2 мм, средние — 2-4 мм, крупные — более 4 мм);

в) прозрачность (прозрачные, полупрозрачные, непрозрачные).

· в отраженном свете (чашку держат горизонтально крышкой вверх):

а) поверхность (гладкая, складчатая, радиально исчерченная, блестящая, матовая и т.д.);

6) рельеф (плоский, выпуклый и т.д.);

в) цвет (бесцветные - грязно-белые относятся к бесцветным; пигментированные - указать цвет пигмента).

Микроскопическое изучение колоний (х8):

· чашку Петри кладут вверх дном на предметный столик микроскопа, слегка опускают конденсор и с помощью объектива х8 изучают:

а) край колонии (ровный, волнистый, зубчатый и т.д.);

б) структуру (гомогенная, зернистая и т.д.).

Поскольку для посева использовался ЖСА, то отмечается образование радужного венчика, свидетельствующего о лецитиназной активности.

На ЖСА стафилококк растет в виде круглых, диаметром 1-3 мм, непрозрачных, выпуклых, блестящих, пигментированных колоний, имеющих ровный или волнистый край, гомогенную структуру и маслянистую консистенцию. Вокруг колоний может образовываться радужный венчик (лецитиназа «+»).

При отсутствии на чашках лецитиназоположительных колоний исследованию подвергают колонии, сходные по морфологии с колониями стафилококков.

1.2. Из части отобранных изолированных колоний приготовьте фиксированные препараты, окрасьте по Граму и промикроскопируйте. При приготовлении препарата определяют консистенцию, прикасаясь петлей к поверхности колонии (маслянистая, слизистая, крошащаяся и т.д.).

В препарате, окрашенном по Граму, стафилококки — это грамположительные мономорфные кокки, располагающиеся, в основном, неправильными группами, гроздьевидно.

1.3. Оставшуюся часть изолированной колонии засейте зигзагом на поверхность скошенного агара в пробирке. Посев следует проводить со дна пробирки, не касаясь конденсата. Пробирки с посевом поместите в термостат на 18-24 часа при 37°С.

Для ориентировочного определения массивности роста используют её оценку в крестах, обозначая:

++++- сливной рост;

+++ - сплошной рост изолированных колоний;

++ - значительный рост (до 100 колоний);

+ - единичные колонии (10-25).

5.4. Итоговый контроль знаний:

- ответы на вопросы по теме занятия

· Цель II этапа бак.метода.

· Последовательность работы на II этапе бак.метода.

· Понятие культуральных свойств микроорганизмов.

· Методы изучения колонии микроорганизмов.

· Какие признаки колоний изучают в проходящем свете, какие - в отраженном свете и микроскопически (х8, х90)?

· Цель микроскопического исследования колоний.

· Цель посева части изолированной колонии на скошенный агар.

- решение ситуационных задач:

1.В мазках, окрашенных по Граму, обнаружены грамположительные мономорфные кокки, расположенные скоплениями, напоминающими гроздья винограда.

Назовите микроорганизмы с учётом морфологии и взаимного расположения.

Каковы тинкториальные свойства выявленных микроорганизмов?

2. На чашках первичного посева получен сплошной рост микроорганизмов. Можно ли переходить к следующему этапу работы? Что необходимо сделать в такой ситуации?

Поиск по сайту: