Помощничек
Главная | Обратная связь


Археология
Архитектура
Астрономия
Аудит
Биология
Ботаника
Бухгалтерский учёт
Войное дело
Генетика
География
Геология
Дизайн
Искусство
История
Кино
Кулинария
Культура
Литература
Математика
Медицина
Металлургия
Мифология
Музыка
Психология
Религия
Спорт
Строительство
Техника
Транспорт
Туризм
Усадьба
Физика
Фотография
Химия
Экология
Электричество
Электроника
Энергетика

Методы определения тромбоцитов



Определение количества кровяных пластинок в 1 л крови в обычной лабораторной практике производится по методу Фонио, основанному на сравнительном подсчете в мазке крови (разбавленном для предотвращения агглютинации кровяных пластинок 14% раствором сернокислой магнезии) количества тромбоцитов по отношению к 1000 эритроцитов. Подсчет производится на интенсивно окрашенном мазке с помощью сетчатого окуляра (или вкладного окошечка).

Существуют и другие методы подсчета количества тромбоцитов в счетной камере с использованием различных красящих и консервирующих жидкостей, а также фазовоконтрастной и люминесцентной микроскопии.

Существует метод подсчета тромбоцитов в камере, при котором кровь разводят в какой-либо консервирующей жидкости, например в 5-7% растворе трилона Б (для предотвращения свертывания крови и агглютинации кровяных пластинок), заполняют камеру и подсчитывают тромбоциты по обычному правилу, описанному выше. Меньшее распространение получили методы определения количества тромбоцитов с помощью фазоконтрастной и люминесцентной микроскопии. В настоящее время наиболее перспективен метод подсчета с использованием электронно-автоматических счетчиков.

Электронно-автоматический метод. Тромбоциты можно подсчитывать в принципе на любом счетчике частиц типа "Культер" и "Целлоскоп". Существует, кроме того, аппарат "Культер", специально разработанный для подсчета тромбоцитов, который показывает количество пластинок в 1 л крови.

 

2.2. Особенности структуры, формы, величины тромбоцитов

 

Показано существование в тромбоцитах трех главных структурных зон: периферической (трехслойная мембрана, содержащая рецепторы для коллагена, АДФ, серотонина, эпинефрина, тромбина, фактора Виллебранда; на внешней стороне мембраны расположен аморфный слой из кислых мукополисахаридов и адсорбированных факторов свертывания плазмы крови), зоны "золь-гель" (микротубулы – каналикулярный комплекс, часть которого открыта, т. е. имеет выходы на наружной мембране; микрофиламенты, содержащие контрактильный протеин "тромбостенин", участвующий, как считают, в поддержании дискообразной формы пластинок; от его свойств зависит ретракция кровяного сгустка) и зона органелл (гликогеновые гранулы, митохондрии, α-гранулы, плотные тела, аппарат Гольджи). Гранулы высокой плотности содержат серотонин, адреналин (адсорбируются из плазмы через каналикулярную систему), кальций, неметаболические адениннуклеотиды (АДФ, АТФ), 4 фактор тромбоцитов (антигепариновый) и, возможно, гранулярную часть 3 фактора тромбоцитов; α-гранулы содержат гидролитические ферменты (кислую фосфатазу, β-глюкуронидазу, катепсины), фибриноген тромбоцитов. Для поддержания структуры и функции тромбоцитов необходима энергия, которая поставляется АТФ в процессе гликолиза, а также окислительного фосфорилирования.

В норме 1/3 вышедших из костного мозга тромбоцитов депонируется в селезенке, остальная часть циркулирует в крови, выполняет свои функции в процессах свертывания и регуляции проницаемости сосудистой стенки, подвергается разрушению под влиянием различных причин и в результате старения. Тромбоциты максимально живут 10-12 дней, средняя продолжительность их жизни составляет 6,9±0,3 сут. Ежедневно обновляется 12-20 % общей массы кровяных пластинок в организме. Количество кровяных пластинок в периферической крови у одного и того же индивидуума подвержено большим колебаниям, зависящим от состояния вегетативной нервной системы и сосудистого тонуса.

В патологических условиях кровяные пластинки принимают неправильную форму – овальную, грушевидную, колбасовидную, в виде теннисной ракетки и т.п.

По величине различают: микро-, нормо-, макро- и мегатромбоциты.

В нормальных условиях большинство (90-92%, по данным разных авторов) кровяных пластинок имеет диаметр от 1,5 до 3 мкм, в среднем 2-2,5 мкм. К микропластинкам относятся формы,имеющие диаметр менее 1,5-1 мкм, к макроформам – пластинки с диаметром свыше 3-до 5 мкм; мегатромбоциты имеют диаметр в 6-10 мкм, т.е. равный и даже превосходящий размер нормальных эритроцитов.

На основании статистически достоверных данных выделяют, в зависимости от величины диаметра, четыре основные группы кровяных пластинок, составляющих нормальную тромбоцитарную формулу.

По степени зрелости различают (Jurgens и Graupner) юные, зрелые и старые кровяные пластинки. Кроме того, имеются не всегда встречающиеся в крови формы раздражения и дегенеративные формы.

Юные формы по сравнению со зрелыми формами характеризуются нерезкими контурами, несколько большей величиной, составляющей 2.5-5 мкм в диаметре, выраженной базофилией гиаломера и нежной, необильной азурофильной зернистостью. Зрелые формы – наиболее типичные, округлой или овальной формы, с ровными контурами; характеризуются четким разделением на грануломер с хорошо выраженной, красно-фиолетового (при окраске по Романовскому) цвета зернистостью, и гиаломер смешанного голубовато-розового цвета; средняя величина 2-4 мкм. Старые формы характеризуются насыщенно фиолетовой окраской грануломера, занимающего всю центральную часть кровяной пластинки, и светло-розовой окраской узкого гиаломера по периферии пластинки. Пластинки как бы сморщены, диаметр их 0.5-2.5 мкм. Формы раздражения отличаются большим полиморфизмом и значительной величиной. Встречаются гигантские колбасовидные, хвостатые и тому подобные пластинки, с длинным диаметром – 7-9 и даже 12 мкм. Дегенеративные формы или не содержат зернистости (гиалиновые, голубые пластинки), или имеют темно-фиолетовую зернистость в виде комков или мелких осколков (пылинок); встречаются и вакуолизированные пластинки.

Анализ представленных тромбоцитограмм обнаруживает чрезвычайную вариабельность в распределении различных форм тромбоцитов. Сами пределы колебаний "нормальных" процентных соотношений различных форм кровяных пластинок у одних и тех же авторов настолько различны, что на основании этих данных трудно вывести "нормальную" тромбоцитограмму. Можно только отметить, что по данным различных отечественных и зарубежных авторов, большинство (65-98%) кровяных пластинок относится к зрелым формам; прочие формы: юные, старые, атипические – формы раздражения, дегенеративные, вакуолизированные – в нормальных физиологических условиях либо совершенно не встречаются, либо отмечаются в единичных экземплярах.

"Помолодение" тромбоцитограммы или сдвиг влево тромбоцитарной формулы с появлением большего числа юных форм наблюдается при состояниях повышенной регенерации костного мозга, в частности в связи с кровопотерями, гемолитическим кризом, после спленэктомии и т д.

"Постарение" тромбоцитограммы или сдвиг вправо тромбоцитарной формулы с появлением большого числа старых форм рядом авторов рассматривается как признак ракового заболевания.

Формы раздражения присущи тромбоцитопеническим состояниям (болезнь Вергольфа). При миелопроферативных заболеваниях (хронический миелолейкоз в стадии обостения, мегакариоцитарный лейкоз, остеомиелосклероз, полицитемия) в периферической крови наряду с формами раздражения встречаются "тромбобласты ", представляющие собой фрагменты ядер мегакариоцитов, окруженные цитоплазмой с отшнуровывающимися пластинками.

Новые данные в отношении структуры кровяных пластинок и их морфофизиологии получены при помощи новых методов исследования – фазовоконтрастной и электронной микроскопии.

При рассматривании тромбоцитов в электронном микроскопе они представляются звездчатыми, паукообразными образованиями с нитевидными отростками – псевдоподиями.

При помощи электронной микроскопии удалось установить, что грануломер состоит из многочисленных гранул овальной или круглой формы величиной от 240 Å (= 0.024 мкм до 0.2 мкм Различают α-, β-, γ- и δ-гранулы.

α-Гранулы составляют большую часть гранул грануломера; их считают производными митохондрий, в них содержится фактор 3 пластинок, являющийся липопротеидом.

β-Гранулы относят к митохондриям вследствие наличия в них типичных внутренних структур – крист. Последние хорошо различимы при электронномикроскопическом исследовании ультратонких срезов кровяных пластинок.

γ-Гранулы связывают с так называемым внутриклеточным аппаратом Гольджи. γ-Гранулы морфологически неоднородны, они состоят из пузырьков, вакуолей, канальцев, составляющих подобие эндоплазматической сети.

δ-Гранулы овальной формы, в них содержатся весьма контрастные зерна, являющиеся, по-видимому, компонентами железосодержащего пигмента ферритина.

В настоящее время установлено, что большинство пластиночных факторов свертывания крови локализовано в грануломере.

Гиаломер также неоднороден – он состоит из множества переплетающихся между собой волоконец. Из этих волоконец и образуются отростки и псевдоподии тромбоцитов.

Появление цитоплазматических отростков в кровяных пластинках, представляющихся in vivo в циркулирующей крови в виде кругло-овальных или несколько угловатых образований, свойственно нормальным, активным формам, участвующим в свертывании крови. Появление отростков зависит от свойств стабилизирующей среды; оно замедлено в гепаринизованной крови, в хелатоне (трилоне Б, используемом для лейкоконцентрации) и ускорено в физиологическом растворе (0.85 %) хлористого натрия и цитрате натрия.

Менее активные формы, так называемые формы покоя, сохраняют in vitro кругло-овальную форму, не выпуская отростков.

При дальнейшем наблюдении in vitro кровяные пластики начинают распластываться. При этом площадь каждой взятой в отдельности кровяной пластинки увеличивается во много раз по сравнению с исходными размерами (до 30-40 мкм).

Электронномикроскопические исследования показали, что тромбоциты обладают мембраной толщиной около 45 Å. О роли гиаломера и грануломера высказываются различные мнения. Большинство авторов, изучавших в фазовоконтрастном микроскопе последовательные изменения тромбоцитов в процессе свертывания крови, считают, что грануломер (хромомер) является носителем тромбопластических свойств пластинок, а гиаломер – ретрактильных свойств.

Являясь безъядерными осколками гигантских клеток костного мозга, кровяные пластинки выполняют важнейшие биологические функции, в первую очередь в процессе гемостаза, благодаря содержащимся в них многочисленным ферментам.

Физиологическая активность кровяных пластинок, в первую очередь в процессах гемостаза, связана с содержащимися в них ферментами.

В литературе указывают на существование в кровяных пластинках 49 ферментов.

Благодаря ферментам в тромбоцитах осуществляется процессы как анаэробного (цикл Эмбдена-Мейергофа), так и аэробного (цикл Кребса) гликолиза ("дыхания") и ресинтеза аденозинтрифосфорной кислоты (АТФ) в условиях анаэробиоза. Тромбоциты не в состоянии включать аминокислоты, что говорит об их неспособности к синтезу белка.

В процессе свертывания крови АТФ расщепляется и быстро – в течение 30 мин – исчезает на 80-90%. При отсутствии свертывания крови АТФ держится на том же уровне.

В тромбоцитах обнаружены также эстеразы, кислая фосфатаза, глюкуронидаза, апираза, холинэстераза, протеазы, пероксидазы, амилаза, дипептидаза, фосформоноэстераза, пирофосфатаза и другие ферменты.

Кровяные пластинки человека обладают групповой специфичностью, соответствующей групповой специфичности эритроцитов. Достоверно установлено наличие в тромбоцитах антигенов (агглютиногенов) А, В и D (системы резус). Не исключается возможность того, что указанные антигены адсорбируются кровяными пластинками из плазмы. Групповая специфичность кровяных пластинок (как по системе АВО, так и по системе (резус-фактора) должна быть учитываема при переливаниях тромбоцитной массы.

Поддержание в физиологических условиях нормального количества тромбоцитов в крови возможно благодаря наличию регуляторных механизмов. Гуморальные стимуляторы (тромбопоэтины) и ингибиторы тромбоцитопоэза (тромбоцитопенины) выявлены в эксперементальных и клинических условиях (при тромбоцитопениях различного характера, в крови здоровых лиц), однако относительно их природы, места образования и свойств единого мнения нет. Очевидно роль селезенки в регуляции тромбоцитопоэза, как и гемопоэза вообще.

 

3. Тромбоцитоз, тромбоцитопения. Причины

 

Тромбоцитоз – увеличение числа тромбоцитов выше, чем 400·109 в 1 л крови, бывает первичным (является результатом первичной пролиферации мегакариоцитов, редко изолированной, а чаще как часть миелоидной метаплазии костного мозга) и вторичным (возникает на фоне какого-либо заболевания). Вторичный тромбоцитоз (реактивный) обычно не столь выражен, как первичный, реже осложняется тромбозом или кровотечением (появление кровотечений-носовых, желудочно-кишечных, объясняют функциональной неполноценностью тромбоцитов и нарушением образования протромбиназы) и исчезает при устранении причины (выздоровлении, улучшении).

Количество кровяных пластинок возрастает при состояниях возбуждения симпатической нервной системы (чревного нерва), после введения адреналина, физических напряжений ("тренинг-тромбоцитоз" спортсменов), при травмах с размозжением мышц ("миогенный" тромбоцитоз). На основании экпериментальных данных подобные тромбоцитозы возникают в связи с выбросом в периферическую кровь кровяных пластинок из резервуара – селезенки (у спленэктомированных животных при аналогичных условиях тромбоцитоза не наблюдается). Указанные сдвиги носят чисто перераспределительный характер.

Тромбоцитозы реактивного характера наблюдаются при асфиксии, травмах, ожогах, гемолитических кризах, после кровотечений, в периоде выздоровления после инфекционных заболеваний, в послеоперационном периоде после денервации синокаротидной зоны и особенно после операций спленэктомии. «Аспленический» послеоперационный тромбоцитоз достигает максимума обычно на 7-14-й день. В этот период наиболее велика возможность возникновения послеоперационных сосудистых тромбозов и вторичных кровотечений в связи с разрывом затромбированных сосудов и вторичным снижением числа кровяных пластинок.

Наиболее частые случаи тромбоцитоза представлены в табл. 5

Таблица 5.Тромбоцитозы

Основные группы Клинические формы
Первичные   Вторичные   Эритремия, хронический миелолейкоз, миелофиброз Острый ревматизм, ревматоидный артрит, язвенный колит, туберкулез, цирроз печени, остеомиелит, амилоидоз, острое кровотечение, карцинома, лимфогранулематоз, лимфома. После спленэктомии (как правило), больших хирургических операций (иногда), в ответ на введение винкристина.  

Тромбоцитоз как часть миелопролиферативного синдрома (эритремии, хронического миелолейкоза, миелофиброза) может быть очень выражен, обычно стоек и сочетается с лейкоцитозом, а при эритремии – также с эритроцитозом. В случаях, когда тромбоцитопоэз превалирует и тромбоцитоз является главным компонентом синдрома, иногда применяется термин "эссенциальная" тромбоцитемия (однако этот термин не оправдан).

Тромбоцитопения –снижение числа тромбоцитов в крови менее 180·109/л отмечается при угнетении мегакариоцитопоэза, нарушении продукции тромбоцитов. Тромбоцитопения наблюдается при спленомегалии, повышенной деструкции и/или утилизации тромбоцитов.

К тромбоцитопениям распределительного характера относятся и тромбоцитопении после парентерального введения белка, гистамина, туберкулина (проба Декгвица).

Физиологическое снижение кровяных пластинок за счет повышенного тонуса блуждающего нерва может наблюдаться во время сна, после принятия пищи. Физиологическими являются и закономерные колебания количества тромбоцитов, наблюдающиеся у женщин в связи с менструальным циклом: снижение в предменструальный период (считая со дня овуляции) и возрастание до верхних границ нормы в послеменструальный период.

Более стойкий характер носят тромбоцитопении при лекарственных, радиационных и других интоксикациях, а также при иммуноагрессивных заболеваниях и патологии системы крови (лейкозы), сопровождающихся геморрагическим синдромом.

О механизмах тромбоцитопении и наиболее частых клинических её формах будет рассмотрено в последующих лекциях.

 

 




Поиск по сайту:

©2015-2020 studopedya.ru Все права принадлежат авторам размещенных материалов.