Тема 8. Газова хроматографія

Методи біохімічних досліджень

Тема 1. Стратегія і тактика біохімічних досліджень.

Класифікація методів дослідження в біохімії. Застосування біохімічних методів в медицині, біотехнології, екології та інших галузях.

Тема 2. Руйнування клітин і екстракція.

Способи гомогенізації. Типи гомогенізаторів. Основні принципи екстракції. Розчини, які використовуються для екстракції. Буферні розчини і спеціальні добавки. Особливості приготування екстрактів рослинних і тваринних тканин, мікроорганізмів. Отримання органел.

Тема 3. Гравіметричні методи аналізу.

Основні теоретичні положення гравіметричних методів аналізу. Сили, які діють на частинку в роторі центрифуги. Швидкість осідання частинок. Центрифугування, типи центрифугування, типи роторів, їх використання у практиці біохімічних досліджень. Диференційне центрифугування. Центрифугування в градієнті густини. Методи отримання ступінчастих і неперервних градієнтів густини.

Тема 4. Характеристика спектральних методів дослідження.

Спектрофотометрія у видимій, ультрафіолетовій та інфрачервоній областях. Будова спектрофотометрів та фотоелектроколориметрів. Величини, які характеризують поглинання. Молярний коефіцієнт поглинання. Оптична густина. Побудова калібрувальних графіків. Способи визначення концентрації речовин.

Флуорометричні методи аналізу. Види флуоресценції. Переваги та недоліки флуоресцентних методів аналізу. Вивчення структури біомакромолекул за допомогою флуоресцентних методів аналізу. Гасіння люмінесценції: температурне, концентраційне, сторонніми домішками. Хемілюмінісценція.

Тема 5. Загальна характеристика хроматографічних методів аналізу.

Класифікація хроматографічних методів. Класифікація за принципом фракціонування. Класифікація за способом елюції. Класифікація за розташуванням нерухомої фази. Хроматографічний процес. Хроматографічна зона. Кінетична теорія хроматографії. Оптимізація умов фракціонування. Градієнтна елюція. Хроматографія макромолекул.

Тема 6. Адсорбційна хроматографія.

Вимоги до адсорбентів, розчинників. Умови роботи колонок. Сорбція білків. Сорбція нуклеїнових кислот. Фракціонування і очистка білків. Фракціонування і очистка нуклеїнових кислот. Розділення двониткової і однониткової ДНК. Очистка гібридів ДНК-РНК.

Тема 7. Розподільна хроматографія та її типи.

Нормальнофазова хроматографія. Розподільна хроматографія в обернених фазах. Високоефективна рідинна хроматографія. Хроматографія на папері. Характеристика носіїв та розчинників. Двовимірна хроматографія. Тонкошарова хроматографія.

Тема 8. Газова хроматографія.

Газоадсорбційна хроматографія. Газорідинна хроматографія. Речовини, які використовуються як нерухома фаза в газорідинній хроматографії. Характеристика детекторів, якими обладнані сучасні газорідинні хроматографи.

Тема 9. Іонообмінна хроматографія.

Компоненти хроматографічної системи. Іонообмінники. Елюент. Іонні та неіонні взаємодії речовини і сорбенту. Вибір умов динамічної іонообмінної хроматографії, типу елюції, рН буфера для елюції, концентрації солі, об’єму елюента, розмірів колонки. Збирання і обробка фракцій. Регенерація іонообмінника. Умови елюції білків з колонок. Принципи будови амінокислотних аналізаторів.

Тема 10. Гель-проникна (гель-фільтрація, або молекулярно-ситова) хроматографія.

Принцип методу. Конфіцієнти розподілу. Графік селективності. Ефективність фракціонування. Галузі застосування. Очистка і фракціонування макромолекул. Визначення молекулярної маси методом гель-хроматографії. Знесолювання і заміна буфера.

Тема 11. Афінна (хроматографія спорідненості) хроматографія.

Принцип методу. Компоненти афінного сорбента. Ліганди з індивідуальною специфічністю. Ліганди з груповою специфічністю. Біоспецифічна елюція. Електрофоретична елюція. Афінна елюція з іонообмінника. Застосування афінної хроматографії.

Тема 12. Електрофоретичні методи аналізу.

Основні типи електрофорезу. Характеристика носіїв, які використовують в електрофоретичних дослідженнях. Електрофорез з рухомою межею. Зональний без підтримувального середовища та в підтримувальному середовищі з капілярною структурою. Зональний електрофорез в градієнті густини.

Тема 13. Електрофорез в агаровому і агарозному гелях.

Аналітичний електрофорез в агаровому (агарозному) гелі. Препаративний електрофорез в агаровому і агарозному гелях.

Тема 14. Електрфорез в поліакриламідному гелі.

Фізико-хімічні властивості складових частин гелю. Аналітичний електрофорез в поліакрилвмідному гелі. Препаративний електрофорез в поліакрилвмідному гелі.

Тема 15. Електрофорез білків.

Поведінка білків при електрофорезі. Розділення білків за розміром молекул: визначення їх молекулярної маси. Двовимірний електрофорез.

Тема 16. Електрофорез нуклеїнових кислот і нуклеопротеїдів.

Електрфорез нуклеїнових кислот в агаровому і агарозному гелях. Електрфорез нуклеїнових кислот в поліакриамідному гелі. Ізоелектрофокусування нуклеїнових кислот. Виявлення нуклеїнових кислот після електрофорезу.

Поиск по сайту: