Визначення кількості еритроцитів і лейкоцитів

Визначення вмісту гемоглобіну

Обладнання і реактиви:

1. Гемометра Салі.

2. Піпетка від гемометра Салі.

3. 0,1 N HCI.

4. Дистильована вода.

5. Піпетка.

6. Скляна паличка.

7. Голка Франка або скарифікатор

Для кількісного визначення гемоглобіну користуються зазвичай колориметричним способом. Принцип визначення полягає в перетворенні гемоглобіну крові в солянокислий гематин і порівнянні кольору отриманого з наявним в приладі стандартом. Приладом для визначення служить гемометр Салі. Він складається з двох запаяних пробірок зі стандартною кольоровий рідиною 1% розчин солянокислого гематина в гліцерині), що містить 16,67 г% гемоглобіну (16,67 г на 100 мл крові). Між ними розташована градуйована пробірка, що має дві шкали. Одна - з поділками від 0 до 23 служить для визначення гемоглобіну в грамах на 100 мл крові, тобто в грам відсотках; інша шкала з поділками від 0 до 140 показує одиниці гемоглобіну (відсоток гемоглобіну).

Хід дослідження:

У градуйовану пробірку, що знаходиться в середньому прорізі, наливають до початку шкали 0,1 N розчин соляної кислоти. Потім з місця уколу на м'якоті пальця піпеткою Салі набирають кров до мітки 0,02 мл (20 мм3), насасивая її ротом через надіту на верхній кінець піпетки гумову трубочку зі скляним мундштуком. Кінчик піпетки обтирають від крові і опускають в пробірку з соляною кислотою, обережно видуваючи вміст, щоб не утворилися бульбашки повітря. Ударяючи пальцем по нижній частині пробірки, ретельно розмішують кров і залишають її на 5 хв. для утворення солянокислого гематину. За цей час набирають кров для іншої частини аналізу. Після закінчення цього часу підливають в пробірку по краплях дистильовану воду, розмішуючи скляною паличкою до тих пір, поки колір розчину досліджуваної крові повністю зрівняється з кольором стандартної рідини. Відзначають, на якому розподілі знаходиться в градуйованій пробірці нижній меніск розчину крові, що показує вміст гемоглобіну в г% або одиницях (відсотках).

Оцінка отриманих даних:

У нормі вміст гемоглобіну в грам-відсотках у чоловіків коливається від 13,3 до 18 г%, у жінок - від 11,7 до 15,8 г% (у середньому 13,7); в одиницях (відсотках) у чоловіків - від 80 до 108 од., у жінок - від 70 до 95 од.

Визначення кількості еритроцитів і лейкоцитів

Обладнання і реактиви:

1. змішувачі (меланжери) або пробірки для підрахунку еритроцитів і лейкоцитів.

2. 3% - розчин NaCl (для розведення еритроцитів) або рідина Гайема.

3. 3% розчин оцтової кислоти.

Рахункова камера.

Змішувачі представляють собою капілярну піпетку з розширенням-ампулою, яка містить намистинку, сприяє змішанню крові з розвідною рідиною. Змішувачі, призначені для підрахунку еритроцитів, володіють капіляром більш тонкого калібру і більше об'ємистій ампулою на них нанесені мітки одна - 0,5 інша - перед входом в ампулу - 1.0, третя - біля виходу з ампули - 101.

При наборі крові до позначки 0,5 вона виявиться розведеної в 200 разів, при наборі до 1,0 - у 100 разів. Для розведення еритроцитів застосовують 3% розчин кухонної солі або рідина Гайема, в якій краще зберігається форма еритроцитів. Змішувач для лейкоцитів має більш широкий просвіт капіляра і меншу за величиною ампулу. Нанесені три мітки: 0,5, 1,0 і 11. Це дозволяє розвести кров у 10, або в 20 разів (частіше розводять у 20 Раз). Для розведення лейкоцитів використовують 3 - 50% розчин оцтової кислоти. Оцтова кислота розчиняє еритроцити, що дозволяє вести підрахунок тільки лейкоцитів.

Рахункова камера.

Для підрахунку формених елементів найбільш часто застосовується камера типу Бюркера з вигравіруваною на ній сіткою Горяєва. Рахункова камера складається з товстого предметного скла з особливим поглибленням. На дні поглиблення лічильної камери викарбувана сітка, в клітинах якої і підраховуються формені елементи. По краях поглиблення є піднесення, куди накладається покривне скло. Між нижньою поверхнею цього скла і дном поглиблення утворюється замкнутий простір, яке і являє собою лічильну камеру. Глибина камери відповідає 0,1 мм. Рахункова камера типу Бюркера розділена навпіл глибокою канавкою і має на кожній половині сітку Горяєва, що дозволяє відразу вважати 2 краплі, не заповнюючи знову камери. Сітка Горяєва має 225 великих квадратів (15х15), 25 з яких поділені на малі, по 16 у кожному; є також порожні квадрати, зібрані в групи по 4 квадрати. Всього в сітці 100 великих порожніх квадратів, зібраних в 25 груп (5X5). Кожна сторона маленького квадратика дорівнює 1 / 20 мм, а оскільки висота камери становить 0,10 мм, то обсяг дорівнює 1 / 4000 ММЗ.

Хід дослідження:

Для підрахунку еритроцитів беруть змішувач для еритроцитів, надягають гумову трубочку, легким насасиваніі набирають кров з уколу до позначки 0,5. Надлишок крові видаляють фільтрувальним папером, після чого кінчик змішувача занурюють у приготований заздалегідь флакон з 3% розчином кухонної солі або розчином Гайема і засмоктують розчин, заповнюючи всю ампулу до мітки 101. Негайно знімають гумову трубку, затискають змішувач по довжині між великим і вказівним або середнім пальцем і струшують протягом 3 хвилин. Після цього заповнюють лічильну камеру, зливають

1-2 краплі і випускають подальшу краплю на сітку.

Для підрахунку лейкоцитів кров з місця уколу набирають до позначки 0,5, потім розводять 3% розчином оцтової кислоти до мітки 11. Енергійно струшують протягом 3 хвилин, після чого зливають

1-2 краплі і заповнюють лічильну камеру. При роботі з пробірками для підрахунку еритроцитів, наливають 4 мл 3% розчину кухонної солі або рідини Гайема і в неї випускають 0,02 мл. крові, відміряну піпеткою від гемометра Салі. Для підрахунку білих кров'яних елементів у пробірку наливають 0,4 мл 3 - 5% розчину оцтової кислоти і 0,02 мл крові. Енергійно струшують пробірки, потім в рідину опускають піпетку з гемометра Салі і, набравши вміст, заповнюють лічильну камеру.

Заповнення рахункових камер:

Добре вимите і витерте шліфоване покривне скло накладають на виступаючі бічні краї. М'якоттю великих пальців покривне скло притирають, рухаючи вгору і вниз, весь час щільно притискаючи, поки не з'являться, так звані, Ньютонові кільця. Перед заповненням камери знову енергійно струшують змішувачі, випускають 2 краплі на фільтрувальний папір, а третьою заповнюють щілину між камерою і покривним склом. Рідина по капілярності засмоктується між ними і заповнює простір над сіткою. Рідина при заповненні камери не повинна затікати в жолобки, якщо це стукає, то її видаляють фільтрувальним папером.

Підрахунок еритроцитів. Підрахунок проводять через 1-2 хвилини (коли еритроцити осядуть на дно камери), користуючись об'єктивом 40Х і окуляром 7X, або об'єктивом 8Х і окуляром 15Х.

Щоб не збитися з рахунку, дотримуються певної послідовності рахунку: пересуваючи з квадрата в квадрат по горизонталі один ряд зліва направо, наступний - справа наліво. Вважають, крім що знаходяться всередині квадрата, всі еритроцити, що лежать на двох лініях, наприклад, на лівій і верхній, і пропускають всі лежать праворуч і знизу. Вважати еритроцити треба в 5 великих квадратах, тобто в 80 маленьких.

Щоб уникнути неточності, внаслідок не цілком рівномірного розподілу крові в камері, вибирають для підрахунку не 5 сусідніх квадратів, а просуваються по всій сітці.

Кількість еритроцитів в 1 ММЗ (шукане) обчислюють наступним чином: одиницею рахунку завжди, при кожній підрахунку, в будь-якій сітці служить малий квадрат. Обсяг його, як було зазначено, дорівнює 1 / 4000 мм 3. Злічивши еритроцити в 5 великих квадратах (80 малих квадратів), ділять цю кількість на 80 і множать на 200 (ступінь розведення крові) і на 4000 (щоб отримати кількість клітин у всьому кубічному міліметрі); практично, отже, отримане число множать на 10000 ( додають чотири нулі).

Приклад: У 80 маленьких квадратах підраховано 480 еритроцитів. Отже, кількість еритроцитів у 1 ММЗ крові одно: 480 * 4000 * 200

------------ = 4800000 80

Підрахунок лейкоцитів. Для отримання досить точного результату при підрахунку лейкоцитів необхідно порахувати не менше 100 великих квадратів (= 1600 малих). Кількість лейкоцитів в 1 мм3 виходить таким чином: число, перелічене в3100 великих квадратах, ділять на 1600 (призводять до 1 малому квадрату) і множать на 20 (ступінь розведення) і на 4000; практично, скорочуючи постійні цифри формули, кількість полічених лейкоцитів (при розведенні в 20 разів) множать на 50.

Приклад: у 100 великих квадратах пораховано 120 лейкоцитів.

Отже, кількість лейкоцитів у 1 ММЗ одно

120 * 4000 * 20

-----------= 6000

Оцінка отриманих даних:

Нормальна кількість еритроцитів у 1 ММЗ від 4500000 до 5000000. У нормі середня кількість лейкоцитів в 1 мм3 від 5000 до 9000 (крайні межі 4000 - 9000).

Обчислення колірного показника:

Знаючи число еритроцитів у крові та вміст у ній гемоглобіну, можна вирахувати якою мірою насичений кожен еритроцит. Колірний показник відповідає максимальному вмісту гемоглобіну в одному нормальному еритроциті, величина його умовно приймається за одиницю.

Для обчислення колірного показника користуються такою формулою:

знайдену кількість Нв знайдене число еритроцит.

------------------------: -------------------------

нормальна кількість Нв нормальне число еритроцит.

Практично визначення колірного показника виробляють шляхом ділення відсотка (одиниць) гемоглобіну на подвоєні дві перші цифри числа еритроцитів. Якщо ж число еритроцитів менше 1000000, то відсоток Нв ділиться на подвоєну першу цифру числа еритроцитів.

Обчислення кольорового показника (середній вміст гемоглобіну у одному еритроциті)

Поиск по сайту: