· Культуральные – при задержке роста на плотных или жидких средах в присутствии антибактериального препарата;
· Молекулярные – без культивирования, например, по маркёрам изменений в метаболизме бактерий;
Генотипические:
· Выявление специфических для каждого антибактериального препарата генных мутаций после амплификации (ПЦР) соответствующего участка ДНК.
Культуральное определение чувствительности М. tuberculosis к противотуберкулёзным препаратам
· Классические методы, такие как метод абсолютных концетраций или метод пропорций, выполняются на плотных средах, содержащих противотуберкулёзные препараты.
· Системы бульонного культивирования ВАСТЕС 460, ВВL MGIT, ВАСТЕС 960, МВ /ВасТ - препараты растворяются в бульоне.
Цель исследования ЛЧ состоит в том, чтобы определить отличается ли клинический изолят от «дикого» штамма МБТ по степени чувствительности к соответствующему антимикробному агенту:
· При оценке результата микробиологического исследования культура МБТ признаётся устойчивой, если микобактерии дают рост на питательной среде в присутствии критической концентрации заключённого в неё противотуберкулёзного препарата.
· Критическая концентрация – это самая низкая концентрация, которая подавляет рост 95% «диких» штаммов МБТ.
· Для каждой среды или системы культивирования подобраны соответствующие критические концентрации препаратов.
Метод абсолютных концентраций (метод разведений на плотной или жидкой питательных средах)
Набор пробирок:
· С питательной средой, модифицированной противотуберкулёзными препаратами разных концентраций;
· Контрольной пробирки без препарата;
· Пробирки, содержащей препарат для выявления роста нетуберкулёзных микобактерий.
Интерпретация результатов
· Чувствительная культура – при наличии < 20 колоний (при том, что имеется обильный рост на контрольной пробирке без препаратов)
· Устойчивая культура – при наличии > 20 колоний
Метод пропорций на плотных средах
Принцип: выявление процента бактерий, устойчивых к критической концентрации лекарственного препарата
Метод: сравнение числа колоний, выросших в присутствии лекарственного препарата, с числом колоний в контроле
Критерий оценки: устойчивость – более 1% по сравнению с числом колоний в контроле
Два подхода:
1. Непрямой метод: заражение чистой культурой
2. Прямой метод: заражение мокротой (БК+)
Непрямой тест
· Выполняется с бактериальной суспензией, приготовленной из первично изолированной культуры
· Преимуществом непрямого метода является возможность точно калибровать культуру, используя оптический стандарт мутности, поскольку результаты прямого метода в некоторых случаях не могут быть оценены из-за избыточного или из-за неудовлетворительного роста на контрольной среде без препарата.
Прямой тест
· Предусматривает инокуляцию бактериоскопически положительного материала непосредственно в среду, содержащую противотуберкулёзный препарат
· Преимущество: сокращение времени диагностики
· Недостаток: микробная контаминация, которая более часто наблюдается и может исказить оценку результатов.
Системы с использованием жидких питательных сред
Общие черты:
1. Автоматизированы полностью или частично
2. Ускоренное выявление роста бактерий (7-14дней) – по выделению СО2 или по поглощению кислорода
3. При выделении культуры из мокроты добавляют комплекс антибиотиков для задержки роста контаминантов, что делает среду селективной
4. Определение лекарственной чувствительности – к препаратам 1-го ряда, непрямым методом, с использованием критических концентраций (для каждой системы)
5. Ответ лаборатории (с момента получения мокроты)- через 2-4 недели (включая выделение культуры)