Помощничек
Главная | Обратная связь


Археология
Архитектура
Астрономия
Аудит
Биология
Ботаника
Бухгалтерский учёт
Войное дело
Генетика
География
Геология
Дизайн
Искусство
История
Кино
Кулинария
Культура
Литература
Математика
Медицина
Металлургия
Мифология
Музыка
Психология
Религия
Спорт
Строительство
Техника
Транспорт
Туризм
Усадьба
Физика
Фотография
Химия
Экология
Электричество
Электроника
Энергетика

Інактивована культуральна антирабічна вакцина



Виробництво медичних, комерційних антирабічних вакцин з мозку вівці, кози, кролика, новонародженої миші, щура або з шкірно-м'язової тканини качиного зародка, заражених адаптованим до центральної нервової системи нейротропними штамами вакцинного вірусу і інактивованих фенолом, ефіром, β-пропіолактоном або ультрафіолетовим промінням, засноване на розмноженні вакцинного вірусу in vitro. Істотним недоліком цих вакцин є високий вміст в них баластної мозкової або шкірно-м'язової тканини, тому нервово-тканинні антирабічні вакцини викликають нейропаралітичні ускладнення з частотою від 1 : 500 до 1 : 17 000.

Антирабічна вакцина виготовляється в культурі клітин (Vaccinum antirabicum culturalis inactivatum), є принципово новим препаратом в трьох аспектах: 1) розмноження вакцинного вірусу здійснюється in vitro; 2) вірус, що використовується як вакцинний штам, адаптований до клітин нирки і тому володіє низькою нейровірулентною активністю (нейротропні штами цього віруса не розмножуються в культурі клітин внутрішніх органів без попередньої адаптації); 3) вакцина повністю вільна від баластної мозкової тканини і містить мінімальну кількість клітинного детриту.

З 1974 р. в Інституті поліомієліту і вірусного енцефаліту АМН СРСР організовано промислове виробництво цієї вакцини.

Характеристика препарату. Вакцина є культурою атенуїрованого вірусу сказу (штам Внуково-32), вирощеною в культурі первинних клітин нирок молодих сирійських хом'яків (ПСХ), інактивовану ультрафіолетовим промінням і ліофілізованую із замороженого стану в умовах вакууму.

Штам Внуково-32, як і штам ЕRА, є одним з генетичних варіантів штаму SАD. Останній був виділений з мозку собаки і фіксований після 130 церебральних пасажів на білих мишах. Згодом він пройшов 25 почергових пасажів через організм миші при інтрацеребральному зараженні і в культурі первинних клітин ПСХ.

В Інституті поліомієліту і вірусного енцефаліту АМН СРСР після 10 додаткових почергових пасажів цей штам підтримується виключно в культурі первинних клітин ПСХ при зниженій температурі (32°С). Зниження його нейротропності і патогенної активності для тварин помічено після 31 серійного пасажу в культурі клітин ПСХ при 32°С. Інша лінія штаму SАD під назвою ЕRА, атенуйована в результаті 30 серійних пасажів в культурі первинних клітин нирки новонародженого поросяти, як жива культуральна антирабічна вакцина за кордоном має широке використання для профілактичної імунізації сільськогосподарських тварин і собак. Культуральна антирабічна вакцина з штаму ЕRА за імуногенною активністю і нешкідливістю визнана кращим сучасним препаратом для використання у ветеринарній практиці.

До клітинної системи висуваються наступні основні вимоги: високе накопичення вакцинного, вірусу, відсутність онкогенних і спонтанних контамінантів, економічність, тому обрані первинні клітини нирок сирійського хом'яка.

Із одної пари нирок сирійського хом'яка готується в середньому 400мл напівфабрикату вакцини, з 4 сирійських хом'яків можна приготувати стільки культуральної антирабічної вакцини, скільки вакцини типу Фермі з мозку однієї вівці.

Технологічна схема процесу виробництва вакцини ділиться на наступні етапи: збір і трипсинізація нирок, вирощування моношару клітин, зараження кліток і їх інкубація збір вірусовмісного матеріалу, введення в серію, освітлювання, інактивація вірусу, розлив у флакони і ліофілізація.

Трипсинізацію тканин нирки проводять 0,25% розчином трипсину при кімнатній температурі і постійному перемішуванні. Після триразового промивання сольовим розчином клітини ресуспендують в 0,5% розчині гідролізату лактальбуміну (ГЛА) на сольовому розчині Хенкса (рН 7,0-7,1), що містить 30% нормальної сироватки великої рогатої худоби, в концентрації 400 000 клітин в 1 мл, в об'ємі 300 мл вносять у півторалітрові флакони для культивування клітин і інкубують при 37°С.

Через 5-6 діб після посіву клітин флакони з суцільним моношаром, без ознак дегенерації відбирають для зараження: середовище видаляють, клітини промивають 3 рази (по 150 мл сольового розчину) і вносять посівний вірус у дозі 0,01-0,001 LD50 на клітину. Адсорбцію вірусу проводять при 22°С протягом 1 год. Потім в кожний флакон вносять 300 мл 0,5 % розчину ГЛА на розчині Ерла (рН 7,4), що містить 3% людського альбуміну (початковий, розчин альбуміну містить 20% білка).

При, зараженні в суспензії трипсинізовані і відцентрифуговані клітини ПСХ суспендують в середовищі росту і вносять посівний вірус з розрахунку 0,01-0,005 LD50 на клітину. Адсорбцію вірусу проводять при 22-23°С протягом 11/2 год. Потім суспензію інфікованих клітин переносять в середовище розводячи до концентрації 400 000 клітин в 1 мл, розливають у флакони і поміщають в термальну кімнату при 37°С до утворення моношару. Заражені клітини інкубують при 32°С. Збір вірусу проводять через сифон, починаючи з 9-го дня з моменту зараження клітин. Надалі збір вірусу здійснюють з інтервалами 2-3 дні. Вірус збирають з флаконів з нормальним моношаром клітин. Вірусовмісна культуральна рідина, зібрана одночасно з однієї серії клітинної культури, складає первинний збір. Останній зберігають при -20°С. Після відповідних контрольних досліджень проб первинного збору складають серію напівфабрикатів в об'ємі 15-30 л. Напівфабрикат освітлюють шляхом центрифугування в сепараторі.

Вакцину інактивують в іррадіаторі ультрафіолетового проміння, який є закритою камерою, що містить зверху 4 підвішені БУВ-30П і під ними - скляний диск, що обертається. В Інституті поліомієліту і вірусного енцефаліту АМН СРСР використовується диск з нержавіючої сталі. Вірус по закритій системі трубок подається на диск, що обертається, і по відцентровій силі розподіляється на ньому тонким шаром (менше 1 мм); у цей же час відбувається опромінювання вірусовмісного матеріалу. Опромінений препарат стікає на зовнішню поверхню диска і звідти по трубках поступає в стерильний бутиль.

Перед розливом в напівфабрикат вакцини додають 10% розчин желатози і 75% розчин сахарози, стерилізовані автоклавуванням. Кінцева концентрація желатози і сахарози у вакцині складає відповідно 1 і 7,5 %. На потоковій автоматичній лінії «Strank Со» вакцину розливають у флакони з нейтрального скла по 3 мл і заморожують при температурі від -60 до -65°С. Після 6 год. їх переносять у вакуум-сушильну камеру. Ліофілізацію проводять при температурі 34-З6°С протягом 23-30 год. та при температурі 20-24°С протягом подальших 8-14 год. в режимі автоматики. Флакони наповнюють аргоном, закривають спеціальними гумовими пробками і закатують алюмінієвими ковпачками. На кожний флакон з вакциною наносять назву препарату, номер серії, контрольний номер, термін придатності.

Вимоги до виробничих приміщень. Для забезпечення виробництва антирабічної вакцини необхідні приміщення для карантину тварин, віварій для утримання, зараження і обробки овець, спеціальні лабораторні приміщення для виготовлення напівфабрикату вакцини, розливу, ліофілізації і фасування. Останні три технологічні етапи можуть здійснюватися централізовано у відповідних відділеннях.

 

 




Поиск по сайту:

©2015-2020 studopedya.ru Все права принадлежат авторам размещенных материалов.